A.稀释平板计数法-食品微生物学.ppt

1、个体计数法 （1）直接计数法 借助显微镜观察测定 （2）间接计数法(活菌计数法) 提问：前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？ 活菌可以繁殖 提问：细菌繁殖的可见现象是什么？ 产生菌落（固体培养基培养）、菌液混浊（液体培养基培养） 计数原理：一个细菌可繁殖成一个菌落或一群细菌. 缺点：慢 分固体培养法和液体培养法 一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为宜。 B.稀释液体计数法 特点：液体培养、统计学查表计数 又称MPN法 （或最可能数法） Most Probable Number 例如测定SRB（硫酸盐还原菌，厌氧）的数量 提问：能用稀释平板法计数吗？为什么？ 一般不能，厌氧菌暴露在空气中不能生长（除非厌氧培养箱） (d)统计－查表－计算 根据不同稀释度变黑试管 ①统计出数量指标 三位数及其中最低稀释度 （取变黑的管数最多、稀释度又最低的生长管数，为第一位数字，后面两个稀释度的生长管数为后两位数） 提问：上例情况而言统计数量是几？ ②查表 表——MPN表 MPN三管法测数统计表 c.薄膜计数法 薄膜——微孔滤膜（φ0.45um） （c）统计计数 提问：假如 测出250个菌落，抽滤了50ml自来水，自来水中菌浓度是多少呢？ 250÷50ml=5个/ml自来水 样品中的细菌数量=菌落数÷抽滤样品的体积数 提问：已知什么条件通过测定细菌群体重量知道其数量？ 已知单个细菌的平均重量 除法计算 细菌的湿重量＝10-15~10-11g/个细胞 干重约为湿重的10％~20％。 (1)干重法 悬浮物＝无机物+有机物（包括细菌） 提问：如何确定悬浮物中有机物与无机物的量？ 高温(550℃)灼烧 (2)细胞含N量法 大多数生物包括细菌，细胞内的蛋白质氮含量比较稳定，一般为蛋白质干重15％~16％，平均为16％。 （3）.DNA含量法 同种细菌的DNA含量一致,可通过测定DNA的含量来表示细菌的生长量 细菌研究中常用的三个参数 繁殖代数（n） 指数生长方式： 1 2 4 8… …2n 设接种时细胞数为x1, 时间为t1, 到时间t2后，繁殖n代，细胞数为x2，它们之间的相互关系为： x2 = x1*2n 以对数表示：㏒ x2 = ㏒ x1 + n㏒2 ㏒ x2 - ㏒ x1 ∴ n = = 3.322(㏒ x2 - ㏒ x1 ) ㏒2 生长速度常数（R） n 3.322(㏒ x2 - ㏒ x1 ) R = = t2 – t1 t2 – t1 代时(G) 1 t2 – t1 G = = R 3.322(㏒ x2 - ㏒ x1) 恒浊法：培养基流速可变，菌体以最高生 长速度生长 可获得大量菌体或与菌体生长相平衡的某些代谢产物 恒化法：培养基流速不变，直到菌体生长速度与培养基流速相适应 用于与生长速率相关的研究 几个数据 TDT：特定条件，杀死一定微生物的时间 D值：一定温度，活菌数目减少一个对数周期 Z值：热致死曲线中，时间减少一个对数周期 F值：一定基质，温度为121.1℃，杀死一定微生物的时间8 热灭菌法 干热：火焰、干热 湿热：煮沸、巴氏（60—85℃ 15-30m）、超高温瞬时（135-137℃ 3-5S）、高压蒸汽、间歇 同一种微生物在不同的生长阶段和不同生理生化过程中，对环境pH值要求不同。 例如：丙酮丁醇梭菌 在pH值=5.5—7.0时，以菌体生长为主 在pH值=4.3—5.3时，进行丙酮丁醇发酵 同一种微生物由于环境pH值不同，可能积累不同的代谢产物。 例如：黑曲霉 pH值=2—3时，产物以柠檬酸为主，只产少量草酸。 pH值在7左右时，产物以草酸为主，只产少量柠檬酸。 （三）微生物细胞内的pH值 虽然微生物生活的环境pH值范围较宽，但是其细胞内的pH值却相当稳定，一般都接近中性。 这种维持细胞内稳定中性pH值的特性能够保持细胞内各