6生物分离(工程)技术(第六章沉淀与膜分离技术1)中.pptVIP

②盐析曲线的制作(设操作温度为0℃) (1)将料液分成等体积的数份； (2)计算达到10％--100％饱和度所需加入的硫酸铵量，并在搅拌下分别加到料液中，搅拌1h，静置1h以上； (3)离心（3000rpm）40min后，将沉淀溶于缓冲溶液中，测定其中总蛋白和目标蛋白的浓度； (4)分别测上清液中总蛋白和目标蛋白的浓度，比较沉淀前后蛋白质是否保持物料守恒，检验结果的可信度； (5)以饱和度为横坐标，上清液中总蛋白和目标蛋白浓度为纵坐标作图。 盐析曲线图 ③分步盐析法 4、盐析操作必须注意的问题 中性盐的纯度要高、溶解要充分； 盐析常与等电点沉淀相结合； 选择适当的沉淀温度； 选择适当的蛋白质浓度； 饱和硫酸铵要现配现用； 盐析产品需脱盐后进一步纯化。 等电点沉淀 三、有机溶剂沉淀 1、有机溶剂沉淀的机理 2、有机溶剂的选择与用量 3、温度和pH对有机溶剂沉淀的影响 4、有机溶剂沉淀时应注意的问题 1、有机溶剂沉淀的机理 降低溶液的介电常数， 如：20℃时，水的介电常数为80，82%的乙醇的介电常数为40。 破坏蛋白质胶体分子的水化膜， 破坏蛋白质分子的次级键，使疏水基团暴露，形成疏水层。 2、有机溶剂的选择与用量 丙酮＞乙醇＞甲醇 乙醇的稀释 有机溶剂用量的计算 有机溶剂沉淀曲线 乙醇的稀释 有机溶剂用量的计算 V=V0(S2-S1)/(100-S2)