第六章 基因操作中大分子的分离和分析重点.ppt

第六章 基因操作中大分子的分离和分析 第一节 DNA的分离、检测和纯化 分离纯化核酸总的原则： ①应保证核酸一级结构的完整性（完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究的最基本要求） ②排除蛋白质、脂类、糖类等其他分子的污染 。 ③无其他核酸分子的污染（如抽提DNA分子时应去除RNA分子）。 分离核酸应注意以下几点： ①减少化学因素对核酸的降解：酸、碱 ②减少物理因素对核酸的降解：机械力 ③防止核酸的生物降解：进行核酸分离时最好新鲜生物组织或细胞样品，若不能马上进行提取，应将材料贮存于液氮中或-70℃冰箱中。 1.1 DNA提取的步骤 一、细胞破碎 二、除去与核酸结合的蛋白质等杂质 三、除去其他杂质核酸 四、获得DNA样品 一、细胞破碎 目前细胞破碎主要有物理破碎（主要是机械破碎）和非物理破碎（主要化学破碎和生物酶解） （一）、物理破碎 目前常用物理破碎的方法主要有：均质珠子研磨振荡、液氮研磨、乳钵研磨、冻融、煮沸、超声波(ultrasonication)和微波加热(microwave heating)等。 1、微波加热对于革兰氏阳性细菌非常有效，但是加热必须适中，否则DNA可能被破坏。 2、热激处理包含冷冻和融解两步，冷冻主要是用液氮、冰箱(?70℃、－20℃)或冰，而融解主要是37℃、50℃、65℃ 或100℃水浴，其中冻融循环次数和孵育时间可以根