分子生物学之DNA复制中.ppt

E.coli 复制起点 ori C 245bp, 序列保守 ΦX174单链DNA分子（+），以此为模板，起始合成（-）DNA链，成为（+/-）双链DNA分子，即复制型RFI. （+）链DNA复制起点被特异性A蛋白切断，3‘和5’端游离出来。 （-）DNA为模板， 以 （+）链DNA 3‘-OH为引物，DNA聚合酶III合成新链（+）。 原来的（+）链DNA 被取代。 （+）链DNA被滚出一定 长度后，产生环状（+）链DNA。（+/-）DNA链，继续参与复制。 (1)DNA拓扑异构酶 I (2)DNA拓扑异构酶 II 大片段具有聚合酶和3’→5’的外切核酸酶活性 小片段具有5’ → 3’的外切核酸酶活性 多亚基酶 功能：不是复制酶，是修复酶 3’ →5’ editing mismatch 10-8 10-3 yes 5’ → 3’ exonuclease small fragment repair No No I II III mutation lethal lethal 功能 切除引物，修复 修复 复制 b; primer site c; primer terminator a; template site d; dNTP site e; 5’→ 3’ repair site 36kd e 胰酶 68kd a b c OH OH ppp d ppp ppp ppp ppp OH OH OH DNA polymerase I DNA polymerase II DNA polymerase III DNA pol III (holo Enzyme) α +ε+θ→ 核心酶 α 具有5’ → 3’聚合酶的活性 ε 具有3’→5’的外切核酸酶活性 β功能如同夹子,夹住模板DNA分子 γ是一种依赖DNA的ATP酶 c) 真核生物DNA复制的特点及聚合酶 ● multiple replicon Prok. 105 bp/min Euk. 1000-3000 bp/min 5-300kb/复制子 ● DNApolα + primase (50-60kd) 6-9 Nt RNA as primer 例；果蝇 5000 replicons 受精后genome replication/3min Replicons 扩增到50,000 Euk.染色体在全部复制完成之前起点不再从新开始复制。而Prok. 起点可以连续发动复制。 真核生物在快速生长时，往往采用更多的复制起点。 ● DNA polymerase α δ ε β γ polymerize 5’ → 3’ 均有 Nuclei Nuclei Nuclei Nuclei mt editing 3’ → 5’ — + + — + 功能 RNA引物 DNA合成 修复 修复 修复 3.8. DNA 复 制 速 率 及 拷 贝 数 的 调 控 ( ? ! ) a) 影响因素 多种专一性的蛋白质因子浓度 除引物以外的其他RNA分子（anti-RNA） 营养条件（aa starved的抑制)（原核生物） 细胞复制周期速率的影响（真核生物）… b) 严格的自我调控机制 e.g. plasmid （parasite） independent rep