第三章基因工程制药4节幻灯片.pptVIP

⒉ 影响目的基因在酵母菌中表达的因素 ⑴ 外源基因的拷贝数 ⑵ 外源基因的表达效率 ⑶ 外源蛋白的糖基化 ⑷ 宿主菌株的影响 ⑴ 外源基因的拷贝数 由于外源基因通常是由多拷贝的质粒载体导人宿主细胞的，所以质粒的拷贝数及其在宿主细胞内的稳定性对外源基因的表达起决定作用。有些质粒在导人宿主细胞后，在传代培养中很快丢失，不能用于工业生产。 通过整合质粒，将外源基因整合到宿主染色体上，虽然很稳定，但通常只有一个拷贝，不能高效表达。高度稳定的高拷贝数的质粒可使外源基因高效表达，但高拷贝数的质粒常会引起细胞生长量的降低；而单拷贝的质粒对细胞的最大生长没有影响，因而也能达到较高效的表达。 ⑵ 外源基因的表达效率 　① 启动子 必须将外源基因克隆到酵母菌表达载体的启动子和终止子之间，构成“表达框架”。近端启动子含有一个转录所必需的TATA序列和mRNA起始转录位点——起始密码子。终止子区含有终止mRNA转录所需的信号。　 在酵母菌中经常利用的启动子有组成型启动子和诱导型启动子(下表)。 不同启动子对不同外源基因的表达水平的调节作用明显不同，因此在表达目的基因对应选择合适的启动子。 组成型启动子原则上在酵母的生长各个时期都能发挥作用，但是，当外源基因产物对酵母细胞有不利影响时，过早表达该基因常使酵母菌生长不良以致达不到所需的细胞密度，从而影响了总表达产量。通常采用代谢控制方法来部分缓解这类问