第三章基因工程制药567节幻灯片.pptVIP

第五节 基因工程菌的稳定性 基因工程菌在传代过程中常 　　　出现质粒不稳定的现象。 质粒不稳定可分为： 　　分裂不稳定 　　结构不稳定 分裂不稳定：指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒子代菌的现象。 结构不稳定：指外源基因从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性能的改变。 这种菌与带质粒的菌相比具有生长优势，因而减少了基因表达的产率。 一、质粒不稳定产生的原因 工程菌的质粒不稳定常见的是分裂不稳定，它主要与两个因素有关： ⑴ 含质粒菌产生不含质粒子代菌的 频率； ⑵ 这两种菌的比生长速率差异的大小。 对同一工程菌，控制不同的比生长速率可改变质粒的拷贝数： 低拷贝质粒工程菌产生不含质粒子代菌频率高，增加工程菌中质粒拷贝数可提高质粒稳定性； 高拷贝质粒工程菌产生不含质粒子代菌频率低，但大量外源质粒的存在使含质粒菌的比生长速率明显降低，而一但不含质粒菌产生，便成为优势菌株，对质粒的稳定性不利。 菌体生长速率对质粒拷贝数和质粒稳定性有一影响。 高比生长速率时质粒拷贝数下降，但稳定性增加。 Betenbaugh将质粒复制必需的RepA蛋白克隆在PR启动子的下游，质粒拷贝数受温度诱导，诱导后质粒浓度从60μg／g细胞增加到l,900μg／g细胞，从而增加了基因拷贝数，使外源基因的表达明显增加。 但是在高拷贝质粒菌中质粒拷贝数增加与