卵黄抗体生产及应用技术__培训课件.pptVIP

卵黄抗体生产及应用技术进展 李建涛 2003年6月 内容 一、生产技术 二、应用技术 三、问题及展望 一、 生产技术 (一) IgY产生过程 (二) IgY转移时间、产量及影响产量的因素 (三）IgY结构特点 (四) IgY相对与IgG的优势 (五) IgY纯化、活性测定及保存 (一) IgY产生过程 1.腔上囊是禽类特有的控制体液免疫的淋巴器官； 2.腔上囊中B细胞受到抗原刺激后分化成浆细胞，后者 分泌抗体进入血液； 3.通过血液循环和输卵管上皮层分泌滤泡，产蛋鸡将母 源抗体选择性分泌到卵黄内； 4.卵黄中Ig主要是IgG，叫IgY（IgM和IgA转移到蛋清中）； 5.小鸡通过IgY实现获得性被动免疫(猪、牛、马属通过初乳；兔通过胎盘)； 6.卵黄中含有多种不同抗体（约200种，滴度取决于暴露程度；M.Coleman,2000)； 7.用某种病原菌免疫母鸡，可产生特异性IgY， Sugita等（1996）用26种甲醛灭活病原菌免疫产蛋鸡，IgY 可预防多种疾病。 (二) IgY转移时间、产量及影响产量的因  素 1.用HI、ELISA、ID检查卵黄中IgY，抗体应答形成时间 晚于血清1～2周（Theresa H P,1985；鸭腺病毒），以后与血清测得的HI滴度一致，也有报道卵黄卵黄抗体具有累积作用； 2.经加强免疫，卵黄中特异性IgY效价能维持数月奶至1年； 3.一个卵黄约含100～400 mgIgY，一只产蛋鸡每年可获 得40～50gIgY（D .Carlander,2002），相当与30只家兔同期内血清IgG 产量； 4.卵黄中抗原特异性抗体数量占IgY平均10%，范围是5%（抗胰岛素抗体）～28%（抗鼠IgG抗体），取决于免疫个体、免疫程序及抗原的免疫原性； 续（2） 5.影响IgY产量的因素包括： （1）抗原的质与量（颗粒/可溶性抗原、类毒素/菌体抗原、活菌/死菌，免疫麻痹；高免疫原性和安全） （2）机体方面，A包括产蛋鸡品种（来航鸡、洛岛红鸡及其杂交后代的特异性IgY最高平均浓度有显著差异（D Carlander,2002)、B产蛋率和产蛋间歇与IgY浓度、C蛋重及卵黄重、D营养影响免疫系统发育、免疫机能状况和生产性能、E健康状况（SPF鸡群，起码应无免疫抑制性疾病和垂直传播性疾病，对父母代IBD的免疫） （3）免疫途径、免疫程序、佐剂 续（3） 6.生产卵黄抗体典型的免疫程序（Li-Chan等，2000）： (1)首免，胸肌注射0.5～1mg/羽弗氏完全佐剂等体积乳化抗原； (2)首免后第3、5、7和25周用弗氏不完全佐剂乳化抗原进行2～4次加强免疫，剂量逐步放大1～2倍。这种多次注射加强剂量的抗原使之产生较高自动获得性免疫的过程，称之为“超免疫作用”。 （三）IgY结构特点 1.分子量160～180kDa，稍大于IgG（ 160kDa ）； 2.多一稳定区而少一铰链区（铰链区有较多脯氨酸，具有韧性，与抗体分子构型变化有关）； 续（1） 这种差异没有影响IgY的抗原-抗体结合特性和结合能力，结合价也是2（Warr等, 1995），然而对于pH、温度及蛋白水解等引起构象变化的环境条件，IgY比IgG稳定； 由于缺乏铰链区，两个抗原结合片段（Fab）紧密排列，使IgY缺少韧性及功能种类，在确定条件下沉淀及聚合反应能力降低（Warr等，1995），这使其具有抵抗幼龄动物胃酸屏障的能力。 3.IgY能介导过敏反应，与哺乳动物的IgE相似。 （四） IgY相对IgG的优势 1.高度保守的哺乳动物蛋白质对禽有较强的免疫原性，且产生有效免疫反应所需抗原量小（Danielpour.D,1993），如IGF-1，且免疫应答快； 2.免疫反应具有交叉性，血缘越近，交叉反应程度越高；由于结构上差异，IgY 与IgG几乎没有交叉免疫反应，减少了非特异结合和假阳性；减少非特异性结合使免疫学检测灵敏性提高（达50%）； 3. IgY具有较强的抗热、抗酸、抗离子强度和一定的抗酶分解能力（相对于IgG），提纯后IgY在合适条件储存10年滴度没有损失（Olovson等，1993），幼畜可以口服，经保护处理后成年动物也可以口服，提纯后可以肌注（孙希琪，1995） ； 4.USDA和FDA认为卵黄抗体是GRAS（generally regarded as safe）且已允许商业生产用于人； 续（1） 5.符合动物福利原则。 因此，IgY具有可规模生产、成本低、特异性抗体含量高、安全性好等优点,比实验室条件下通过实验动物制备有限的高免血清更有实用性。 （五）IgY纯化、活性测定及保存 1.鸡蛋储存在