体内药物分析生物样品与样品制备__培训课件.ppt

* 1） 酸用量、浓度和水解温度等条件应通过实验确定 对于遇酸及受热不稳定的药物，可以改用酶水解法 国内文献中，缀合物水解的文献较少。在新药研究中有 * 光谱分析法在样品预处理时，就需经过复杂的精制处理，如若没有紫外吸收，衍生反应后，（表3-11，）这些衍生剂都有紫外，还要进一步进行精制处理，经过这么多处理步骤后，其结果还可靠吗？ 前面原因是指GC，后面检测器不够灵敏是指没有紫外吸收、不具荧光。（画色谱示意图） 操作步骤 * * * * SPE优点： 1、不发生乳化； 2、适应的极性范围较广； 3、提取效率高； 4、方便快速； 5、溶剂用量少； 6、易于自动化； 7、室温下操作，尤其适于处理挥发性及对热不稳定的药物。 * * 三种方法的优缺点比较 * 4.固相微萃取法 类似于气相色谱微量进样器的萃取装置 熔融石英纤维上面涂有有机聚合物(如聚二甲基硅氧烷，PDMS) SPME 集萃取、浓缩、进样于一身，极大地提高了分析速度。萃取模式可分为直接固相微萃取和顶空固相微萃取 * （四）缀合物的水解 尿中药物多数呈缀合状态。含羟基、羧基、氨基和巯基的药物，可与内源性物质葡萄糖醛酸形成葡萄糖醛酸苷缀合物； 含酚羟基、芳胺及醇类药物与内源性物质硫酸形成硫酸酯缀合物。 由于缀合物较原型药物具有较大的极性，不易被有机溶剂提取，常用酸水解或酶水解的方法。 * 3）溶剂解：缀合物（主要是硫酸酯）往往可通过加入的溶剂在萃取过程中被分解。 2）酶水解：葡萄糖醛酸苷酶或硫酸酯酶，也可用二者的混和物。一般在pH4.5-7，37℃数小时，条件温和，选择性强，但费用较高。 1）酸水解：0.1N HCl，100℃，30min， 条件较剧烈，易致药物分解，空白值也高。 为测定尿液中药物总量，要将缀合物水解： * （五）化学衍生化 药物分子中含有活泼H者均可被化学衍生化，如含一COOH、-OH、-NH2、-NH-、-SH等官能团的药物都可被衍生化。 色谱分析是分离分析方法，大部分样品处理后就可上样分析，但某些药物或代谢物极性大、挥发性低、对热不稳定、与其它物质分离不好或对检测器不够灵敏，因此，需要先进行衍生化反应，然后测定衍生物。 衍生化反应的特点 （1）紫外分光光度法 紫外没有吸收或吸收小的药物 （2）荧光光度法 不具天然荧光的药物 （3）色谱分析法 极性大、挥发性低、热不稳定、检测灵敏度不够 A:GC法中的化学衍生化法 使极性药物变成非极性的、易挥发 法的药物；增加药物稳定性；提高光学异构体的分离能力 主要衍生化反应 硅烷化：R-OH；R-COOH；R-NH-R′等极性基团药物 酰化：R-OH；R-NH2；R-NH-R′等极性基团药物 新技术 * 动脉血与静脉血的区别: ，要注意的血气分析（动脉血）1,一个是动,另一个是静; 2,动脉血:携氧量多,呈鲜红色!含大量营养物质, 静脉血:携二氧化碳量多,呈暗红色!含代谢物质(废物); 但肺动脉和肺静脉刚好相反! * 用细竹棒或玻璃棒轻轻剥去试管壁上的血饼。 * 全血的制备是为了测定细胞内和细胞外的药物浓度。 * * * * 有时，还应考虑加入稳定剂： * 精神分裂药物 * * * * 其他书如张君仁 也用液-液萃取，文献也用 涡旋萃取时，蛋白质并没有发生变性。 * 78页 (1)选择合适的溶剂是萃取成功的主要要素，它一方面涉及提取效率和选择性，另一方面也涉及操作是否方便。 先说一下纯度：由于溶剂体积较大，即使原来杂质浓度较低，浓集时，浓度显著增大而干扰测定。解决办法是采用高纯度溶剂、或使用前重新应用全玻璃仪器重蒸馏。 ① 例如，代谢物的极性通常比母体药物高，因此可利用不同极性的溶剂选择性地提取母药和代谢物。 * 图 * 艾杰尔 固相萃取技术手册 * 液-固提取法可以认为是规模缩小的柱色谱法。 * * 见83页 第一步:使用甲醇润湿小柱，活化填料，以便固相表面易于和被分析物发生分子间相互作用，同时，可以除去填料中可能存在的杂质。此时不能上样的原因？ 第二步:用水或适当的缓冲液冲洗小柱，转移过多的甲醇，以便样本与固相表面发生作用。但清洗不宜过分，否则会使甲醇含量过低，从而导致湿润度不足，回收率降低。李增标等比较了柱的湿润性对多种药物吸附的影响后指出，C18柱在甲醇含量大于8%的水溶液中才能保持湿润而有利于药物的吸附，否则，将导致回收率的降低。（若是我，直接用8%甲醇） 第三步:加样， 第四步:用水或适当的缓冲液冲洗小柱，转移样本中的内源性杂质和其他相关杂质。 * 目前，商品化固相提取小柱（cartridge）的应用已比较普遍