第1章_抗植物病虫害基.范例.ppt

植物基因工程 植物生物工程教研室 第一章 抗植物病虫害基因 及其应用 第一节 抗植物虫害基因及其应用 第二节 抗植物病毒基因及其应用 第三节 抗植物真菌病害基因及其应用 第四节 抗植物细菌病害基因及其应用 第一节 概述 一、作用及意义 二、抗性基因的来源 三、抗性基因分类 一、作用及意义 应用抗病虫害基因具有以下优势： 1.???育种周期短、效率高、成本低。 2.???提高产量和品质。 3. 降低生产成本。 4.???防止化学农药污染，避免破坏生态平衡。 5.???克服亲本基因资源缺乏。 6. 抗性性状具有连续性和整体性。 二、抗性基因的来源 ?根据基因来源分为三类： ? 1.植物组织 如豇豆胰蛋白酶抑制剂基因。 2. 动物 如杀菌肽（cecropins）基因。 3. 微生物 如Bt杀虫结晶蛋白基因。 ?三、抗性基因分类 据基因的作用功能和对象分为： 1. 抗虫基因。 2. 抗病毒基因。 3. 抗真菌和细菌基因。 第二节抗植物虫害基因及其应用 一、Bt基因及其应用 二、蛋白酶抑制剂基因及其应用 三、植物凝集素基因及其应用 四、淀粉酶抑制剂基因及其应用 一、Bt基因及其应用 Bt基因的作用原理 2. ICP的分类、结构及抗虫谱 Bt基因的应用 4. 存在的问题及对策 1. Bt基因的作用原理 Bt基因： 是从微生物苏云金杆菌（Bacillus thu-ringicnsis）分离出的苏云金杆菌杀虫结晶蛋白基因，简称Bt基因。 苏云金杆菌属于革兰氏阴性，形成孢子细菌。在芽胞形成过程中，可产生伴胞晶体，它由一种或多种蛋白组成，具有高度特异性杀虫活性，这种蛋白通常被称作δ-内毒素（δ-endotoxins）或杀虫结晶蛋白（in-secticidal crysta1 protein，ICP）。 作用原理： ICP通常以原毒素（protoxin）形式存在，当昆虫取食ICP后，原毒素在昆虫的消化道内被活化，转型为毒性多肽分子。活化的ICP与昆虫肠道上皮细胞上的特异性结合蛋白结合，全部或部分嵌合于细胞膜中，使细胞膜产生一些孔道，细胞因渗透平衡糟破坏而破裂。导致昆虫幼虫停止进食，最终死亡。 ICP的活化过程： 首先ICP溶解在昆虫的肠道里（ICP在碱性条件可溶，而在中性条件下不溶），然后，在蛋白酶的作用下，通过专一性蛋白酶水解切割，ICP被活化。 活化的ICP不被胰蛋白酶或其它蛋白酶破坏。 2．ICP的分类、结构及抗虫谱 据抗虫谱和序列同源性分为四种类型： 类型I （Cry I） 抗鳞翅目（Lepidoptera）昆虫， 对其幼虫有特异的毒性作用。 类型II （CryII） 抗鳞翅目和双翅目（Diptera）。 类型III（CryIII） 抗鞘翅目（Coleoptera）昆虫。 类型IVw（CryIV）抗双翅目（Diptera）昆虫。 类型V（CryV） 抗鳞翅目和鞘翅目。 近年Payne等人则发现了具有抗膜翅目（Hymeno-ptera）以及抗线虫（Nematodes）的ICP。 在每种主要类型中，据序列同源性，ICP又划分为若干亚类 例如，CryI 又分为 IA(a)、IA(b)、IA(c)、I B、IC等。 ICP的结构 CryＩ蛋白为长1100～1200个氨基酸的多肽，大小为130～140kD，其毒性多肽分子是约60～70kD的核心片段。活性区在氨基端，而原毒素羧基端至少一半以上的氨基酸序列没有毒性功能。 只保留编码毒性核心片段的核苷酸序列就能达到抗虫目的。 如，Bt2编码的最短毒性片段位于29至607氨基酸残基处，进一步从基因3′端删除4个密码子（codon）或从5′端删除8个密码子，将完全丧失产物的毒性功能。 3. Bt基因的应用 1987年比利时的Vacek等人利用农杆菌介导法首次获得了转基因烟草植株。 他们使用全长的CryIA（b）基因编码1155个氨基酸和该基因保留了5ˊ端编码毒蛋白核心区域的缺失片段（编码610个氨基酸）。转基因植株对烟草天蛾（Manduca Sexta）幼虫的抗性为75％～100％。 美国Monsanto公司的Fischhoff等人（1987年）获得转Bt基因的番茄植株。 他们用带有CaMV35S启动子的CryI