微生物的纯培养和显微技术研究报告.pptVIP

微生物学之微生物的纯培养和显微技术 普通光学显微镜的分辨率为0.25um。一般细菌都大于0.25um，故可用普通光学显微镜观察。 电子显微镜的分辨率为1nm。不仅能看清细菌的外形，内部超微结构可一览无余。 第一节 微生物的分离和纯培养 干燥保藏法 水分对各种生化反应和一切生命活动至关重要，因此，干燥，尤其是深度干燥是微生物保藏技术中另一项经常采用的手段。 沙土管保藏和冷冻真空干燥保藏是最常用的二项微生物干燥保藏技术 第一节 微生物的分离和纯培养 沙土管保存 　主要适用于产孢子的微生物，如芽孢杆菌、放线菌等。将菌种接种培养，长出大量的孢子，洗下孢子制备孢子悬液，加入无菌的沙土试管中，减压干燥，抽干水分，最后用石蜡、胶塞等封闭管口，置冰箱保存。此法简便易行，并可以将微生物保藏较长时间，适合一般实验室及以放线菌等为菌种的发酵工厂采用。 第一节 微生物的分离和纯培养 冷冻真空干燥保藏 是将加有保护剂的细胞样品预先冷冻，经真空冰的升华作用除去水分。达到干燥的样品可在真空或惰性气体的密闭环境中置低温保存，从而使微生物处于干燥、缺氧及低温的状态，生命活动处于休眠，可以达到长期保藏的目的。 冷冻真空干燥保藏是目前使用最普遍，也是最重要的微生物保藏方法，为大多数专业的菌种保藏机构均采用。 第二节 显微镜和显微技术 显微镜和显微技术 显微镜的种类及原理 显微镜样品的制备 普通光学显微镜(light microscope) 显微镜放大法 电子显微镜(electron microscope) 肺炎链球菌荚膜 荚膜 显微镜放大法 * * 第一节 微生物的分离和纯培养 第二节 显微镜和显微技术 第三节 显微镜下的微生物 第二章 微生物的纯培养和分离技术 微生物的分离和纯培养 无菌技术 用固体培养基分离培养 用液体培养基分离培养 单细胞（单孢子）分离 选择培养分离 二元培养物 微生物的保藏技术 第一节 微生物的分离和纯培养 第一节 微生物的分离和纯培养 无菌技术 　 在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术被称为 无菌技术(aseptic technique)，它是保证微生物学研究正常进行的关键。 微生物培养的常用器具及其灭菌 常用器具：试管、玻璃烧瓶、平皿、培养基 灭菌方法： 高压灭菌－高压蒸汽灭菌，可杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏 高温干热灭菌－玻璃器皿的灭菌 第一节 微生物的分离和纯培养 第一节 微生物的分离和纯培养 接种操作 用接种环或接种针分离微生物，或在无菌条 件下把微生物由一个培养器皿转接到另一个 培养容器进行培养，是微生物学研究中最常 用的基本操作。 接种注意要点－无菌条件下进行，火焰附近 进行熟练的无菌操作，或在无菌箱或操作室 内无菌的环境下进行操作。 用固体培养基分离纯培养 菌落（colony)－单个微生物在 适宜的固体培养基表面或内部 生长、繁殖到一定程度可以形 成肉眼可见的、有一定形态结 构的子细胞生长群体 培养平板－熔化的固体培养基倒入 无菌平皿，冷却凝固后，盛有固体培 养基的平皿 固体培养基－用琼脂或其他凝胶物质固化的培养基 第一节 微生物的分离和纯培养 用固体培养基分离纯培养 稀释倒平板法 涂布平板法 平板划线分离法 稀释摇管法 第一节 微生物的分离和纯培养 第一节 微生物的分离和纯培养 稀释倒平板法 一种较简单的纯种分离方法 缺点 热敏感菌容易死亡 好氧菌容易缺乏氧气死亡 涂布平板法 在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是 涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒 人无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将 一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表 面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个 平板表面，经培养后挑取单个菌落。 第一节 微生物的分离和纯培养 涂布平板法 稀释倒平板法 Pour plate Pour plate 第一节 微生物的分离和纯培养 平板划线分离法 用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的 连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而 减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物 能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。 扇形平板划线分离法 连续平板划线分离法 方形平板划线分离法 第一节 微生物的分离和纯培养 稀释摇管法 对于那些对氧气更为敏感的厌氧性微生物，纯培养的 分离则可采用稀释摇管培养法进行。 将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后 ，冷却并保持在50℃左右，用这些试管进行梯度稀释 待分离材