氯丙醇(DCPMCPD的GC-MS同时测定-2004,221-杂志用-改1-缩.docVIP

稳定性同位素稀释技术结合GC-MS测定酱油多组分氯丙醇的研究 傅武胜1，2 吴永宁1 赵云峰1 张磊1 唐昌东2 （1中国疾病预防控制中心营养与食品安全所，北京,100050,） (2福建省疾病预防控制中心，福州，350001) 摘要 本文首次建立了用两种同位素内标同时测定酱油中4种氯丙醇的GC－MS方法， 样品中加入稳定性氘代同位素内标，采用硅藻土固相层析净化酱油样品，经七氟丁酰衍生化后得到分析物，衍生物在DB-5毛细管柱中经程序升温得到良好的分离，用选择离子存储（SIS）定量。进样量为20～500pg时，峰面积比值与氯丙醇浓度呈线性关系，相关系数均大于0.999，3-氯－1，2-丙二醇（3-MCPD）、二氯丙醇（1,3-DCP、2,3-DCP）的最低检出限分别为0.003、0.005mg/kg；3种浓度水平下加标重复测定6次，3-MCPD的精密度、回收率分别为6.99～16.2%， 98.8～115%；1,3-DCP为3.80～9.25%，75.0～119%；2,3-DCP为7.07～10.4%，93.6～132%，满足了酱油样品中痕量氯丙醇的分析要求。 关键词 气相－质谱（GC/MS）， 氯丙醇， 酱油 前 言 氯丙醇是一种食品污染物，3-氯－1,2-丙二醇（3-MCPD）可使大鼠致癌, 在体外具有遗传毒性，Olsen[1]和Lynch等[2]对此作了全面的概述，JECFA制定了暂定每日最大耐受量（TDI）为2μg/kg.bw[3]，1,3-二氯－2-丙醇（1,3-DCP）为动物遗传毒性致癌物。已经发现各类食品中都有3-MCPD污染，但主要是酸水解植物蛋白（HVP）及含HVP的配制酱油中氯丙醇污染严重，许多国家已经制定了3-MCPD或1,3-DCP的限量标准或临时性措施[4] ，一般要求3-MCPD低于1.0mg/kg，欧盟要求低于20μg/kg [５]，这使得对检测方法提出了很高的要求。最初采用二氯荧光黄喷雾的薄层层析法来半定量测定HVP中mg/kg级的3-MCPD酯[６]，也有采用毛细管电泳方法[７]，其它基本采用气相色谱或气相－质谱联用法定量，大多数只能测定单一的单氯取代氯丙醇（3-MCPD、2-MCPD）[8~17]或双氯取代氯丙醇（1,3-DCP）[18~20]，也有一些同时测定多组分氯丙醇的文献[21~26]，但仅Chung等[24] 以单一同位素d5-3-MCPD为内标测定调味品中的3种氯丙醇，国内外尚无采用两种同位素内标同时测定酱油中4种氯丙醇的报道。 材料与方法 1 试剂 除非另有说明，分析中使用的均为分析纯的试剂。 正己烷（Fisher公司，农残级）、乙醚、正己烷、氯化钠、无水硫酸钠（105℃烘烤3小时后使用）、ExtrelutTM 20硅藻土填料（德国Merck公司）、七氟丁酰基咪唑（HFBI，美国Pierce公司）、3-氯-1,2-丙二醇（3-MCPD）（25ml,Aldrich Chemicals InC.）、1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP,Fluka)和2,3-二氯-1-丙醇(2,3-DCP,97.0%,Fluka)、稳定性同位素d5-3-氯-1,2-丙二醇标准品（98%,1ml,Isotec InC.）、d5-1,3-二氯-2-丙醇标准品(d5-1,3-DCP，98%,5g,Cambridge Isotope LaboratoriesInC.)、超纯水、工业氮气（纯度99.5%,用于溶液的浓缩）、高纯氦气（纯度99.9995%，GC-MS分析用载气）。饱和氯化钠溶液（5mol/L） 氯丙醇混标溶液：用乙酸乙酯分别配制3-MCPD、1，3-DCP、2,3-DCP标准储备液（1000mg/L），用农残级正己烷配制中间溶液（100 mg/L），最后用正己烷配成浓度为2.00mg/L的混合标准使用液。 氯丙醇内标混合液：用乙酸乙酯分别配制d5-3-MCPD 、d5-1,3-DCP的储备液（1000 mg/L），最后用农残级正己烷配成浓度为10 mg/L的混合内标使用液。 2 仪器与装置 CP-3800气相色谱仪，Saturn 2000质谱仪（Varian公司）、CP-8200自动进样器、玻璃层析柱（40cm×2cm i.d.）、旋转蒸发仪、111型N2-浓缩器、Pwsio―002型数显保温培养箱、G-560E型漩涡振荡器、AE 160型分析天平（准确至0.1mg，瑞士Mettler公司，用于配制标准溶液）、AR2130/c型Advanturer电子精密天平（准确至1mg，上海奥豪斯公司，用于称取样品），1.0ml气密注射器、50μl微量注射器，100μl微量进样器、超纯水器、B-2200E1型超声波清洗器。所有玻璃器皿、用具首次使用前用重铬酸钾洗