细胞转染的步骤.docxVIP

转染/doc/1817843.html \l ##B?添加义项??/doc/5382381.html \t /doc/_blankDNA小片段插入体/doc/3923804.html \t /doc/_blank细胞或/doc/6004199.html \t /doc/_blank细胞系的过程。若此DNA未与宿主细胞DNA整合而获表达，称“/doc/7210148.html \t /doc/_blank瞬时转染(/doc/6952426.html \t /doc/_blanktransient?transfection)”；若与宿主细胞DNA整合并随后者的复制而复制称“稳定转染(stable?transfection)”。?10本词条?正文缺少必要目录或最新动态,?欢迎各位?/create/edit/?eid=1817843sid=1922634编辑词条，额外获取10个积分。基本信息中文名称转染外文名称transfection过程真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。?瞬时转染transient transfection稳定转染stable transfection目录展开1?/doc/1817843.html \l 1817843-1922634-1 \o 基本简介基本简介2?/doc/1817843.html \l 1817843-1922634-2 \o 相关分类相关分类2.1?/doc/1817843.html \l 1817843-1922634-2_1 \o 化学转染法化学转染法2.2?/doc/1817843.html \l 1817843-1922634-2_2 \o 物理方法物理方法3?/doc/1817843.html \l 1817843-1922634-3 \o 相关实验相关实验3.1?/doc/1817843.html \l 1817843-1922634-3_1 \o 实验目的实验目的3.2?/doc/1817843.html \l 1817843-1922634-3_2 \o 实验原理实验原理3.3?/doc/1817843.html \l 1817843-1922634-3_3 \o 实验材料实验材料3.4?/doc/1817843.html \l 1817843-1922634-3_4 \o 实验步骤实验步骤4?/doc/1817843.html \l 1817843-1922634-4 \o 研究进展研究进展4.1?/doc/1817843.html \l 1817843-1922634-4_1 \o 转染技术转染技术4.2?/doc/1817843.html \l 1817843-1922634-4_2 \o 转染效率转染效率基本简介转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于/doc/1498266.html \t /doc/_blank启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小，大约1/104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。转染技术的选择对转染结果影响也很大，许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例，细胞数量，培养及检测时间等。相关分类化学转染法包括：1.DEAE-/doc/5415677.html \t /doc/_blank葡聚糖法，2./doc/2588342.html \t /doc/_blank磷酸钙法，3.人工脂质体法。DEAE-葡聚糖是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一，DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物，它与带负电的/doc/2787004.html \t /doc/_blank核酸结合后接近细胞膜而被摄取，用DEAE-葡聚糖转染成功地应用于瞬时表达的研究，但用于稳定转染却不是十分可靠。磷酸钙法是磷酸钙共沉淀转染法，因为试剂易取得，价格便宜而被广泛用于瞬时转染和稳定转染的研究，先将DNA和氯化钙混合，然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀，最后把含有/doc/511325.ht