DNA重组概要.pptVIP

DNA 重组 功能 类型 机制 重组的生物学功能 产生新的基因/等位基因的组合（在减数分裂交换期间） 产生新的基因（如抗体基因的重排） 特定的DNA元件的整合 DNA修复 重组原理的应用 用于染色体上的基因作图（重组频率与基因之间的距离相关） 培育转基因细胞和生物 重组的类型 同源重组—— 发生在近乎相同的序列之间（如在减数分裂） 位点特异性重组——发生在具有一定相似性的序列之间，涉及特异性位点 转座重组——DNA元件从一个位点转移到另一个位点，通常没有序列的特异性 同源重组 也称为一般性重组，它发生在含有同源序列的两个DNA分子之间，即在两个DNA分子的同源序列之间直接进行交换。进行交换的同源序列可能是完全相同的，也可能是近乎相同的。细菌的接合、转导、转化和真核细胞的同源染色体之间的交换等都属于同源重组。 同源重组需要满足的条件 （1）在交叉区域含有相同或几乎相同的碱基序列； （2）双链DNA分子之间发生互补配对； （3）需要重组酶的催化； （4）形成异源双链； （5）发生联会 同源重组的Holliday模型 由Robin Holliday在1964年首先提出，后由David Dressler和Huntington Potter 在1976年提出修改，他们证明了Holliday中间物的存在。 双链断裂模型 重组由双链断裂启动 断裂双链是遗传信息的供体 酶无序列特异性 在2个同源DNA分子之间的第1个稳定的中间物是三链结构 大肠杆菌主要的重组蛋白 RecA RecBCD RuvA RuvB RuvC RecA蛋白 RecA蛋白是一种多功能蛋白质，它参与大肠杆菌所有的同源重组途径，有单体和多聚体两种形式。多聚体由单体在单链DNA上从5′→3′方向组装而成。 RecA的主要功能包括：（1）促进2个DNA分子之间链的交换；（2）作为共蛋白酶促进LexA 阻遏蛋白的自我水解 RecA蛋白在同源重组的具体作用分为3个阶段：（1）RecA的第一个DNA结合位点（初级位点）与单链DNA结合，包被DNA，形成蛋白质-DNA丝状复合物；（2）RecA的第二个DNA结合位点（次级位点）与1个双链DNA分子结合，形成三链DNA中间体，随后单链DNA侵入双链DNA，寻找同源序列；（3）RecA催化链交换，由被RecA包被的单链DNA从5′→3′方向取代双链DNA分子之中的同源旧链，形成异源双链，并发生分叉迁移 RecA介导的链交换 RecBCD蛋白 由RecB、RecC和RecD三个亚基组成。 具有5种酶的活性——外切核酸酶V、解链酶、核酸内切酶、ATP酶和单链DNA外切酶。 RecBCD蛋白参与细胞内的RecBCD同源重组途径——首先它与双链DNA分子自由末端结合，依靠其外切核酸酶V的活性同时降解DNA的2条链，然而，一旦遇到chi（χ）序列，RecD亚基就从复合物中释放出来，留下来的RecBC蛋白开始以解链酶的活性发挥作用，在水解ATP的同时，解开DNA双链，产生单链DNA，为RecA发挥作用铺平道路，最终起动了链交换和重组反应。 RuvA和RuvB DNA解链酶催化分支迁移 RuvA四聚体与Holliday连接结合（两个亚基之间结合一个DNA螺旋） RuvB 是六聚体环，具有解链酶和ATP酶活性 2个拷贝的RuvB与Holliday连接结合（结合到RuvA和2 个DNA螺旋） 分支迁移沿着RecA介导的链交换方向进行 RuvC蛋白 是一种特殊的核酸内切酶，催化Holliday结构的分离，因此被称为解离酶。 以对称的二聚体形式发挥作用，在Holliday结构的中央部位切开4条链中的2条，而导致Holliday结构的拆分。 RuvC的作用具有一定的序列特异性，它作用的一致序列是5′-(A/T)TT↓(G/C)-3′，箭头为切点，因此，只有当分支迁移到该一致序列的时候，RuvC才有机会起作用。 大肠杆菌几种重要的同源重组途径 （1）RecBCD途径 这是大肠杆菌最主要的重组途径。除了RecBCD以外，还需要RecA、SSB、RuvA、RuvB、RuvC、DNA聚合酶I、DNA 连接酶和DNA旋转酶。此外，还需要chi序列。 （2）RecF途径 这主要是质粒之间进行重组的途径，需要的蛋白质有RecA、RecJ、RecN、RecO、RecQ和Ruv等。 （3）RecE途径 位点特异性重组 位点特异性重组是指在DNA特定位点上发生的重组，它需要专门的蛋白质识别发生重组的特异性位点并催化重组反应。尽管在很多情况下，它也需要在重组位点存在同源的核苷酸序列，但是，同源的核苷酸序列并不长。与同源重组一样，位点特异性重组也发生链交换、形成Holliday结构、进行分叉迁移和Holliday结构解离。 位点特异性重组可以