5.实验动物质量监测讲解.ppt

第五章 实验动物质量监测 实验动物质量监测的意义 生物学实验研究的四个基本条件 Animal，Equipment，Information，Reagent ，简称AEIR四要素 这4个要素在整个实验研究中具有同等重要的地位，不能忽略或偏废。事实上，实验动物质量往往成为制约性要素，影响整个实验的质量和水平 实验动物质量监测是实验动物科学的重要内容，是确保实验动物质量的必要手段。 实验工作人员的健康和生命的保证 常见的人畜共患病：流行性出血热、狂犬病、猴B病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、利什曼原虫等 动物生产和繁殖的保证 动物一旦染上传染病，则种群难以净化，一些烈性传染病如鼠痘、兔病毒性出血症等可致动物全军覆没，造成巨大经济损失。 实验结果准确性、规律性、重复性的保证 实验动物质量监测主要包括以下几个方面：遗传质量、微生物与寄生虫质量、饲料质量、环境质量监测。 第一节 遗传质量监测 实验动物的遗传背景与反应特性，是影响实验结果的重要因素。不同遗传背景与反应特性的实验动物，对同一刺激有时可引起不同质和量的反应。为了保存实验动物品种品系特性。使实验动物使用者在动物实验中能得到正确的、可重复的科学数据，保证生物医学研究的良好效果，实验动物生产者在严格遵守品系繁育技术路线的同时，还必须努力做好实验动物遗传质量的严格监测，以防止实验动物遗传上的污染和变异。 如： BALB/c对放射线比其他品系更为敏感。 C57BL/6肿瘤发生率低，A系高。 BALB/c和C3H小鼠对鼠伤寒沙门氏菌的敏感性存在显著差异 SHR为自发性高血压大鼠，心血管疾病发生率高 一、群体管理 管理上人为的粗心最易引起遗传上的混杂，所以对育种群进行恰当的管理是保证遗传质量的最有效方法。每一个实验动物育种机构都应当认真执行良好的育种制度，完善地保持育种记录，基础群应有系谱记录。而要做到以上要求，最重要的因素就是要有训练有素、经验丰富的技术人员，他们应懂得育种体系和方法、记录方法、动物遗传学、实验动物学等知识。 二、免疫学标记监测 （一）皮肤移植法 这是目前最常用和最灵敏的检测亚系内或亚系间组织相容性基因差异的方法。在小鼠和大鼠中普遍采用的是尾部或背部皮肤移植法。皮肤移植法灵敏度高。易掌握，经济。不需昂贵设备，易对植皮成活情况进行观察和判断。由于手术创伤小，动物对移植创伤的抵抗力强。所以不会影响检测结果。可检测出许多H基因。并能有效地测出新发生的、造成亚系变异的遗传混杂和突变。 （二）混合淋巴细胞反应 混合淋巴细胞反应的原理为：异源动物或遗传上有差异个体的淋巴细胞混合或培养相当时间后，这些细胞都开始增大，合成DNA、RNA、蛋白质，甚至进一步裂解。这是植皮排斥反应辨别和扩增阶段的体内对应方法，其结果可预测体内植皮一宿主反应。此反应结果可在7～9天获得，定期地从群体中抽取足够量的动物进行监测能够维护实验动物的品质。 （三）淋巴组织移植 用供体的均质淋巴器官，如骨髓、脾、淋巴结、胸腺或胚胎肝脏制备出单细胞悬液。然后将适量活细胞通过静脉或腹腔注射到受体动物体内，组织相容性由受体中存活者及脾增大者来确定，也可以用放射学方法。根据移植细胞的存活数测定。 三、生化标记监测 通过多种形式的电泳和电聚集．可检定生化标记即同工酶或蛋白质，常用的电泳介质有乙酸纤维素膜、淀粉凝胶、聚丙烯酰胺凝胶。每一种标记系统都需要将缓冲液、温度、时间、电压和电流调整到最佳值．并做特异性染色，最后将得到的带型与公布的生化遗传图式进行比较。如中华人民共和国国家标准GB；T14923-2001公布9种常用近交系大鼠生化位点标记基因(表5-2)。 表5-2 常用近交系大鼠生化位点标记基因 四、骨骼形态特征监测 常采用“下颌骨分析法”来鉴别和检测大小鼠的亚系变异。 将年龄、性别、体重相当的大鼠或小鼠处死后，小心剪下头部，煮沸2～3min以上，加入蛋白水解酶，37℃恒温保持过夜，剔除残余肌肉，除去切齿，仔细分辨出右下颌骨，加以标记，在直角坐标系上测量出多个形态特征参考点距离。将所有测量的平均数作统计分析，利用判别函数确定下颌骨形状。如果测量值集中，则表明被测亚系间无显著的遗传变异。 五、染色体带型监测 可以利用染色体分带技术，鉴别C带和Q带作为染色体标记，用来区分大、小鼠的近交系，在多数大、小鼠的近交系中，所有中期染色体都存在C带材料，同源染色体的C带区域大小相同；不同的近交系，C带材料大小不同，是品系特异的，是一种很有价值的检测亚系变异和混杂来源的方法。 六、现代分