细胞培养基础知识研究报告.pptVIP

细胞培养基础知识 细胞培养常用试剂 细胞污染的鉴别及清除 一、常用试剂 培基 血清 Hank’s液 D-Hank`s液 PBS EDTA 胰蛋白酶 青霉素、链霉素 培养基 根据培养基的来源及成分的明确程度来划分,其发展大致可分为三个阶段: 1、天然培养基阶段(直接采用某些组织凝块、生物性液体和组织提取液等作为细胞的培养基) 2、合成培养基阶段(如MEM、DMEM、RPMll640、F12等) 3、无血清培养基阶段 血清 何谓FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum) ：胎牛血清， CS (calf serum) ：小牛血清。 HS (horseserum)：马血清. 1. 保存血清最好的方法? 建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2. 如何解冻血清才不会使产品质量受损? 建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。 血清的主要作用在于向细胞提供激素(生化因子)、转移蛋白和其它营养物质等 3. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理? 血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。 但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。若欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。 4. 为什么要热灭活血清? 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 Hank`s液与D-Hank`s液 BSS与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致，且配方简单，是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗细胞等，细胞在这种BSS中可生存几个小时。 Hank`s液是常见的平衡盐溶液(BSS)之一。 D-Hank`s液则是无钙镁离子的Hank`s液（也有资料认为除了不含钙镁离子之外也不含葡萄糖）。 Hank`s液配方 Hank`s液（原液）?????? 原液甲： NaCl????????????????????????????? 160g???????????????????????? KCl????????????????????????????????? 8g???????????????????????? MgSO4·7H2O??????????????? 2g???????????????????????? MgCl2·6H2O????????????????? 2g????? 上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。???????????????????????? CaCl2?? 2.8g溶于100ml双蒸水????? 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。?????? 原液乙：?? Na2HPO4·12H2O??????????????? 3.04g????????????????????????? KH2PO4??????????????????????????????? 1.2g????????????????????????? 葡萄糖??????????????????????????????????? 20g????????????????????????? 加入800ml双蒸水，溶解。?????????????????????????? 0.4%酚红溶液????????????????????? 100ml??????? 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。??????? 使用时甲，乙原液按下列比例配成 Hanks 液 ??? 使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO3调整pH值。 D-Hank`s液配方 D-Hanks液????????????? NaCl???????????????????????????????? 4.5g???????????? KCl?????????????????????????????????? 0.2g???????????? NaHCO3???