全自动生化分析仪的常用检测方法（参考）.ppt

A T 试验1 试验2 L M D N P 红线2 红线1 ALM ANP 终点法 终点法——通过检测终点吸光度的改变大小来求出被测物含量。 何为终点？如何判断？ 通常在反应终点附近连续选择两个吸光度值，求其平均值，根据两点的差值来判断反应终点。 终点法 终点时间的确认： 一、根据时间-吸光度曲线 如:Trinder反应测尿酸，反应曲线上3-5分钟 时其A趋向稳定,故可将5分钟作为反应终点。 二、根据被测物反应终点，结合干扰物的反应 情况来确定 如:溴甲酚绿法测血清白蛋白 分类 终点法： 一点终点法 二点终点法 免疫比浊法 双波长法 一点终点法 一点终点法——在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时，选择一个时间点测定吸光度值。 通常在反应终点附近连续读两个吸光度，求出两点的平均值，并根据两点的差值判断反应是否达到平衡。 一点终点法的设置： 以R和S混合之前的空气空白、水空 白或试剂空白的吸光度值为测定计算基点，以反应达到平衡的吸光度读数减去空白读数，校准曲线通过零点且成直线，对于反应速度快的多用。 如：GLU TG CH等 * * Al T （时间） A S+R (吸光度） 一点终点法反应曲线 计算公式： C=(Am-Ab)*K Am----终点读数点的吸光度 Ab----试剂空白吸光度 K----校正系数 二点终点法 第二试剂加入以前，选择某一点读取吸光度Am，经过一定时间后反应达终点后测 第二个吸光度值An,利用两吸光度之差计 算结果。 第一点吸光度值由样本本身或第一试剂与样品的非特异性反应有关，相当于样品空白，可有效的消除样品自身的吸光度，如溶血，黄疸，脂血等的干扰。 * * An T A R2 Am S+R1 (吸光度） （时间） 两点终点 Ax= 样本空白 An - k0 Am （体积校正因子）k0 = Sv+Rl Sv+R1+R2 两点终点法 计算公式： C=(An-K0*Am)*K K0---体积校正因子 K0=(Sv+R1)/(Sv+R1+R2) 免疫比浊法 通过物质对光的散射或透射来测定物质含量的 方法： 散射比浊：特定蛋白分析仪 透射比浊：自动生化分析仪 通常作两点终点法分析，多采用多点校准。 应用：用Ab测定Ag（主要为微量蛋白：IG、 C、APOA1/B、ASO、RF、CRP等），要求Ab 过量，此时Ag-Ab复合物的生成量随Ag的增加 而递增，光散/透射射强度与抗原量成正比。 免疫比浊法 优点： 方法简便 结果准确 可用于自动化仪器检测 缺点：抗体用量大 达平衡时间长 双波长法 消除样品中对测定有干扰的物质的影响； 在试样中含有两个组分a和b时，若要测定组分b,组分a有干扰，应设法消除组分a的吸收干扰。首先选择待测组分b的最大吸 收波长λ1作为测量波长，然后用作图的方法选择参比波长λ2 ，使组分a在这两个波长处的吸光度相等。 双波长法 试样溶液在λ2和λ1两个波长处的吸光度之差，只与待测组分的浓度成正比，而与干扰组分的浓度无关 干扰物质 1.脂血：吸收光谱300～600nm呈下降趋势 2.Hb：350nm、400nm、540nm、580nm 吸收峰 3.胆红素：300～500nm有吸收峰 可见它们的吸收峰都较宽，且同测定波长 有重叠现象。 双波长法 主波长的选择 反应体系中待测组分吸收峰对应的波长，尽量避开或减少来自试剂空白和样本空白对测定组分的干扰，提高特异性和灵敏度。 双波长法 辅助波长的选择： 根据测定波长选择辅助波长，要求干扰物质在测定波长同辅助波长有相同的吸光度，待测物吸光度差异很大。 如:钼酸铵法测P3＋用340nm，而Hb在340 及380nm均有较高吸收峰，选380nm作为辅助波长。 双波长法 双波长测定优点 ： ①消除噪音干扰