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不同浓度的乙醇溶液对从银杏叶中 提取黄酮的影响 （叶小曼、马婕婷、周子灵、黄倩芸、吴绮琳、梁婉霞） （嘉应学院 生科院， 1204班） 摘 要 本实验比较了不同浓度的乙醇溶液对从银杏叶中提取黄酮的影响。以芦丁为标准样品，建立其标准曲线的回归方程；以乙醇体积浓度为单一因素并采用索氏提取器浸提的方法提取黄酮，采用分光光度法检测黄酮的含量，加入显色剂，以510nm为最大吸收波长。结果表明，当乙醇溶液的溶度为80%时黄酮提取率最高，达0.569%。 关键词 银杏叶 黄酮 乙醇 索氏提取器 浸提 1 前言 银杏叶的提取物( GBE) 对扩张血管, 增强血液流量及降低血压都有良好效果, 同时具有解痉、抗过敏及调节新陈代谢的功效。临床用 GBE 防治冠心病、心绞痛、脑老化、老年性痴呆、脑功能不全、哮喘等, 已收到满意效果。当前, 银杏的研究和开发利用在国内外已成为一个热点, 其中又以银杏叶的开发研究为主。 银杏叶萃取物中含四种双黄酮及银杏内脂A, B, C, 用其制成的保健食品和药品正在欧美风行, 国内需求也日趋增加.因此提取银杏叶的有效成分, 对提取物进行分离研究很有必要。本文以不同浓度的乙醇溶液为溶剂，采用90℃下用索氏提取器乙醇浸提的方法提取银杏叶的黄酮，探讨其浸提效果最佳时的乙醇浓度。 2 实验目的 2.1了解用乙醇溶液提取银杏叶中黄酮的原理。 2.2学习并掌握索氏提取器的操作技术。 2.3探讨乙醇体积浓度对从银杏叶中提取黄酮的影响。 3 实验原理 黄酮的提取是根据相似相溶的原理进行的，过程实质是黄酮从植物内部向溶剂中转移的传质过程：溶剂从溶剂主体传递到固体颗粒的表面；溶剂扩散渗入固体内部和内部微孔隙内；黄酮溶解进入溶剂；通过固体微孔隙通道中的溶剂扩散至表面；黄酮从固体表面传递到溶剂主体。在这一系列步骤中，影响黄酮提取的控制因素是黄酮在所选用的溶剂中的溶解度大小以及向溶剂扩散的难易程度。由于黄酮结构和来源的不同，溶解特性差异也很大，因此应根据其极性和水溶性的大小来选择合适的溶剂进行提取。目前，对苷类和极性较大的苷元，常用某些极性较大的混合溶剂（如甲醇：水=1:1）、水、甲醇、乙醇、丙酮等进行提取，而对大多数苷元如异黄酮、黄烷酮、双氢黄酮醇等则采用苯、乙醚、氯仿或乙酸乙酯等极性较小的溶剂进行提取。 4 实验设备 分光光度计；电子分析天平；精宏干燥箱； 高速离心机。 电热套；研钵；目筛。 5 实验材料及试剂 银杏叶；浓度分别为90%、 85%、 80%、75%60℃下恒温烘干至恒重后粉碎，过60目筛。取5g置于250mL的圆底烧瓶中，之后往圆底烧瓶加150mL不同浓度的乙醇溶液，在电热套90℃下用索氏提取器下浸提1.5h,得到第一次的浸提液；再次往圆底烧瓶加50mL相应浓度的乙醇溶液在同样的条件下浸提30min。合并两次的浸提液，将其移入250mL的容量瓶中，定容。为保证实验数据的可靠性，本实验做三次的平行试验。 6.2 粗提液除杂 用移液管从上述粗提液吸取10mL于离心管中，3000r/min离心10min，取上清液，得到最终的黄酮提取液。 6.3 标准曲线的绘制 6.3.1 0.0001g/mL芦丁标准试剂：精确称芦丁5mg，置于50mL容量瓶中，加入适量60%乙醇，在水浴上加热溶解，自然冷却，用60％乙醇稀释至刻度，摇匀。 6.3.2 取10mL容量瓶6只，分别准确吸取0.0001g/mL的标准溶液0、1.0mL、?2.0mL、?3.0mL、4.0mL、5.0mL置于10mL容量瓶中，然后各加30％乙醇补充至5mL，加入5％亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀，放置6min，再加10％硝酸铝溶液0.3mL，摇匀，再放置6min，加4％NaOH溶液4mL，用水稀释到10mL，放置10min。在紫外—可见分光光度计上，在波长510nm处测定吸光度，以吸光度为横坐标，芦丁浓度为纵坐标，绘制标准曲线，如图1所示： 图1 芦丁标准曲线 6.4 黄酮含量测定 取6.2获得的黄酮提取液2.0mL对其稀释4倍，再从经稀释过的黄酮提取液取2mL替代芦丁标准液，其他步骤均同6.3.2,得到吸光度，并由芦丁标准液回归方程计算出黄酮的含量。 根据提取液中黄酮的含量按下式可计算出黄酮的提取率（%）= （C为黄酮的浓度，N为稀释浓度，W为取量） 7 结果及计算 以乙醇溶液为溶剂，温度为90℃，浸提时间为2h。实验结果如下： 表 1 不同浓度的乙醇溶液对浸提效果的影响 试验号 溶质质量分数 吸光度 浓度（g/mL） 提取率（%） 平均提取率（%） 1 90% 0.194 0.0000388 0.382 0.399 90% 0.208