体外模拟药物氧化代谢方法,优势和局限.docx

Anal Bioanal Chem (2008) 391:79–96Biomimetic modeling of oxidative drug metabolismStrategies, advantages and limitationsWiebke Lohmann Uwe Karst体外模拟药物氧化代谢--方法，优势和局限摘要：对药物代谢物的预判是药物研究过程的一项重要任务。除了已经建立方法的使用生物模型的体外和体内模拟方法之外，一些仿生模型也得到了发展。本文概括了三种无酶参与的方法，包括金属卟啉替代其活性中心的细胞色素P450，Fenton试剂，和电化学体外模拟法。尽管没有一种上述方法可以完全模拟所有P450催化的反应，仿生模拟模型仍然表现出相对于标准的体外模拟方法的一些优势。例如，使用金属卟啉催化剂能合成足够多且足够纯的目标产物，从而满足对其进行鉴别和进一步的药学何毒理学实验。电化学体外模拟代谢技术是把电化学与液质联用在线连接，它是一种有前景的用于研究活性代谢物的手段，而且能与其它高通量检测手段联用。本文中详细比较了上述三种方法与细胞色素P450催化方法的优势和劣势吗，还介绍了一些应用前景。引言在新药的研发过程中，一个至关重要的任务是阐明某种待定的候选药物在人体内的代谢机理。药物代谢的主要途径是酶促的生物转化过程，这在大多数情况下是由细胞色素P450类的酶催化的氧化反应所引发的（phase I 代谢）。细胞色素CYP酶是膜约束的含亚铁血红素的单氧酶，它能促使分子氧中一个氧原子与基底结合而同时另一个氧原子被两个电子还原，产生一分子水。CYP的活性中心含有一个原卟啉IX官能团。该官能团上的五号位的基团是半胱氨酸，还有一个空的六号位，它可以作为与分子氧结合的位点。（见图1）Fig 2. 图2CYP催化循环和整个反应过程见图2。（1）酶的无反应活性状态是低自旋的Fe（III）形式，此时六号位被一分子水占据。（2）脱去六号位的水分子（3）Fe（III）被一个电子还原成亚铁价态。催化过程所需的电子由NADPH传递而来。（4）铁离子中心的一个电子和三重态氧的一个电子形成Fe（III）- O键。（5）第二个氧的转移是该循环的决速步，它产生了一个带负电荷的亲核的铁-过氧复合物。（6）接下来的质子化产生了一个铁（III）氢过氧化物中间体。（7）在第二步质子化过程之后，释放出了一分子水，得到一个亲电的铁（IV）氧复合产物。这被认为是活性氧化剂。在释放被氧化的基底之后，含一分子水为取代基的Fe（III）化合物再次生成。当使用单氧供体而不是分子氧时，3-7步骤会通过“过氧化副反应”被“绕过”，这在下面要进行介绍。今年来新衍生的化合物数量激增，这就需要快速分析检测技术，要能同时保证获得关于一个候选药物信息的可靠性以及获得信息途径较为容易。处于经济的考虑，在筛选药物的早期阶段开展这些实验以尽快排除不合适的候选药物是十分重要的。因此，一些化学和酶催化模型以及得到了发展。它们用仿生模拟代谢的方法，以期望在体外能较好的模拟体内代谢的情形。以及建立的体外方法是基于含CYP的各类模型，从肺组织切片到细胞微粒体。有一个适于所有体外模拟体系的大概原则是体外系统的复杂性与其与体内情形的可转移性（可模拟参考的程度）直接（正）相关，而其可行性与其可转移性负相关。（即越容易建立的简单体系，其模拟的效果越差，参考价值越小，但可行性差难建立的体系理论上模拟效果更好）。（见图3）本文主要针对模拟药物氧化代谢过程的无酶促的模型。在简要介绍大部分以及建立的使用CYP酶的体外方法之后，将有选择的讨论一些引起研究者兴趣的化学和电化学模型：（1）仿生金属卟啉代活性中心的CYP酶（2）Fenton试剂催化氧化反应（3）电化学氧化药物与离线和在线检测联用Enzymatic in vitro models在体外模型中的酶用于研究药物代谢的体外模型必须能最大程度的准确反映人肺中的代谢情形。因为肺是人体内外源性物质的生物转变过程的主要场所。因此，比较成熟的体外方法往往是基于来源于肺的CYP酶。文章将按它们对于活器官的可转移性程度来讨论一些常用的体外实验方法。最类似于生命体中肝脏的系统是一个在体外培养存活的肝脏。然而，这样一个精密复杂的模型很难建立，而且重现性会很差。更重要的是，只能使用动物肝脏。肝脏切片仍具备完整肝脏的细胞的空间和组织结构，但这需要特殊的技术和昂贵的设备。此外，这种情况下外层的细胞仍然遭到破坏，基底（基质）就会穿透中层细胞组织进入细胞内部。使用原代肝细胞的方法的已经被广泛应用和报道。肝细胞含有药物代谢过程所需的全部类的酶，就目前报道的实例来看，可以使用肝细胞来研究新的化合物（药物）的酶促反应。对产物的分离过程会比较复杂而且十分耗时，而且有可能导致细胞的破裂。使用不同批的细胞实验