性激素六项的检测及临床应用.ppt

性激素六项的检测及临床应用 免疫学检测发展简介 免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对检测信号进行放大和显示，因此常被用于检测蛋白质、激素等微量物质。 免疫学检测发展简介 免疫分析经历了放射免疫检验、荧光免疫检验、酶标免疫检验等不同时期，化学发光免疫检验是免疫分析发展的一个新阶段，它环保、快速、准确的特点已得到人们的普遍认识。 因此化学发光免疫分析是通往免疫检验完美境界的必经之路。 化学发光免疫分析技术原理 化学发光免疫分析 （Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。 化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。其机制为某些化合物（发光剂或发光底物）可以利用一个化学反应产生的能量使其产物分子或反应中间态分子上升至电子激态。当此产物分子或中间态分子衰退至基态时，以发射光子的形式释放能量（即发光）。 免疫测定(immunoassay)是利用抗原体反应来测定标本中微量物质的方法。 化学发光免疫分析技术原理 1.使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 2.使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 3.洗涤后加入发光底物，酶促使发光底物发光，通过专用的仪器检测光子的数量，从而反算出未知抗原或抗体的浓度。 化学发光免疫检测原理 在化学发光免疫分析，基本原理同酶联免疫技术(ELISA)，常采用双抗体夹心法、竞争法、等反应模式。 检测方法的比对 1、化学发光与酶免的对比2、化学发光与放免的对比3、化学发光与时间分辩荧光检测的对比4、化学发光的突出优点 化学发光与酶免的对比 酶免原理： 1.使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 2.使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 3.洗涤后加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。 化学发光免疫检测的灵敏度与可测范围远远高于酶免产品，兼具ELISA法简便的操作方法与较短的反应时间。 化学发光与酶免的对比表 酶 标 化学发光 测量精度 定性/半定量测量 定量测量 人体伤害 底物有致癌性 无 有效期 较短 长 干扰因素 多 极少 测试项目 少 多 化学发光与放免的对比 放免原理是使用具有放射性的I125作标记物，然后用测量射线计数仪放射性（125I）。对环境的污染及对身体的危害，已经为重视环保的国家逐步取消。（如整个欧洲仅尚存几个放免试验室） 125I的半衰期短而导致其试剂有效期短 标记物125I的稳定性差，导致试剂盒批间、批内的变异较大； 标准曲线有效期短，必须每次定标，造成浪费。操作繁琐，出报告时间长。 化学发光与放免的对比表 放 免 化学发光 测量精度 较高 高 人体伤害 放射性 无 有效期 较短 长 干扰因素 较多 极少 测试项目 较少 多 化学发光与时间分辨的对比 时间分辨免疫检测原理和化学发光基本一样，只是标记物改为稀土元素，不用发光底物但需要外在的稳定光源照射，光的波长产生stoke位移，并有一个时间滞后以便于检测波长改变后的光子数量。1、化学发光成本低于时间分辨荧光免疫分析 。2、化学发光比时间分辨荧光免疫试剂盒更稳定 3、化学发光免疫分析试剂盒对对测试环境条件要求低 。4、化学发光不需要外光源，仪器可靠性更高 化学发光与时间分辩荧光的对比 化学发光 时间分辩荧光 标记物 酶-发光底物两级放大 稀土离子，如铕 稳定性 稳定性非常好 影响被标记物的生物活性与免疫活性 灵敏度 灵敏 稍高于化学发光 反应体系 接近中性 酸性，易引起蛋白质变性 包被技术 不透明微量孔壁吸附,提高分析灵敏度,降低本底 采用透明微量孔壁吸附，孔壁的透明度会引起,本底干扰 技术性 新技术，很成熟 新技术，不成熟 干扰因素 干扰极小 容易受内外源稀土离子的干扰 测试项目 项目齐全 缺少部分项目。如：贫血（叶酸，铁蛋白，维生素B12） 化学发光免疫分析的优点 1．灵敏度高：这是CLIA关键的优越性，其灵敏度可达10-16mol/L（RIA为10-12mol/L）。又如化学发光底物（如AMPPD）可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏5х105倍。 2．宽的线性动力学范围：发光强度在4～6个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度（OD值）为2.0的范围相比，优势明显。虽然RIA也有较宽的线性动力学范围，