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实验一 黄柏中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定（10学时） 【目的要求】 1. 掌握黄柏中提取盐酸小檗碱的原理和方法。 2. 熟悉盐酸小檗碱的化学性质和鉴定方法。 3. 掌握渗漉法、盐析法、结晶法的基本操作方法。 【实验原理】 黄柏为芸香科(Rutaceae)植物黄皮树（Phellodendron chinense Schneid）及黄柏树(Phellodendron amurense Rupr.)的干燥树皮。树皮中含有小檗碱(ererine)、木兰花碱(Magnoflorine)、黄柏碱(Phellodendrine)等多种生物碱及内酯、甾醇等，其中以小檗碱为主要药效成分(中华人民共和国药典，2000)，含量为1.4%-5%(川黄柏含量较高)。其性寒、味苦，具有清热燥湿、泻火解表、退虚热之功效。 1.小檗碱(ererine)异名黄连素，分子式[C20H18NO4]+，分子量336.37，黄色针状结晶。作为临床上一种常用的广谱抗菌药，小檗碱主要用于菌痢、胃肠炎、痈肿等细菌性感染。 现代研究证明小檗碱有抗肿瘤、抗心率失常、降压、降血糖等作用，在临床上有越来越广泛的应用，需求量日益增加。 2.溶解性：能缓缓溶于冷水中（1:20），微溶于冷乙醇（1:100），易溶于热水和热乙醇，微溶或不溶于苯、氯仿和丙酮，硝酸盐极难溶于水，盐酸盐微溶于冷水（1:500）但较易溶于沸水，硫酸盐和枸橼酸盐在水中溶解度较大（1:30），盐酸小檗碱为黄色结晶，含2分子结晶水，220℃时分解并转变为棕红色小檗红碱，285℃时完全熔融。 3.小檗碱为季铵碱，其游离型在水中溶解度较大，其盐酸盐在水中溶解度较小。利用小檗碱的溶解性及黄柏中含黏液质的特点，先将药材用石灰水润湿，使药材吸水膨胀，小檗碱游离，同时可使黄柏中含有的粘液质沉淀。用水渗漉法提取小檗碱，再加盐酸使其转化为盐酸小檗碱沉淀析出，结合盐析法得到盐酸小檗碱。 【实验步骤】 1.提取 称取黄柏粗粉100g置大蒸发皿中，加入适量石灰乳搅拌均匀，放置溶胀20min，加入6倍量的饱和石灰水（或1%Ca(OH)2溶液）浸泡30min后装入渗漉筒内，以5～6mL/min速度渗漉。收集渗漉液500～600mL即可停止渗漉。 2.取上项提取液，加入石灰乳调pH11～12，静置沉淀，脱脂棉滤过，滤液用浓盐酸调pH2～3，再加入溶液量6%-8% NaCl，搅拌使溶解，溶液静置过夜，析晶，滤取结晶，得盐酸小檗碱粗品。 3.精制 将盐酸小檗碱粗品放入25倍量沸水中，于水浴上加热使溶解，趁热滤过，滤液加浓HCI调pH 2左右，放置1-2小时，滤取结晶，纯化水洗至pH 4，80℃以下干燥，得精制盐酸小檗碱。 4.盐酸小檗碱的鉴别 （1）取盐酸小檗碱少许，加稀硫酸2mL溶解后，加漂白粉（或次氯酸钠）少许，即显樱红色。 （2）取盐酸小檗碱少许，加稀硫酸2mL使溶解，加浓硝酸1～2滴，即显樱红色。 （3）取盐酸小檗碱约0.05g，溶于5mL热水中，加入10%NaOH溶液2mL，显橙色。溶液放冷，加入丙酮约0.5mL，放置，有黄色丙酮小檗碱结晶析出。 【基本操作注意事项】 1.实验原料尽可能选用小檗碱含量较高的川黄柏，或小檗碱含量较低的关黄柏，后者粘液质较多过滤麻烦。 2.加入氯化钠的目的是将小檗碱转化成盐酸小檗碱并利用其盐析作用，降低其在水中的溶解度。其用量不宜过少，否则盐析效果不好，收率过低。 3.在精制盐酸小檗碱时，因为盐酸小檗碱几乎不溶于冷水，放冷易析出结晶，所以水浴加热溶解后，要趁热滤过，防止盐酸小檗碱在滤过时析出结晶，使滤过困难，产量降低。 【思考题】 1.怎样从黄柏中提取分离盐酸小檗碱？原理是什么？为什么加石灰乳？ 2.通过从黄柏中提取盐酸小檗碱，试述药材粉碎度等对提取的影响。 3. 试析生物碱的分离方法 实验二 槐花米中芸香甙的提取、精制和检识（12学时） 一、 槐米中芦丁的提取 槐米系豆科槐属植物（Sophora japonica L．）的未开放花蕾。味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。槐米常炒炭应用。 槐米的主要化学成分为芦丁，亦称芸香苷，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。芦丁广泛存在于植物界，已发现的含芦丁植物至少在70种以上，其中以槐花米和荞麦叶（含量约8%）含量较高，可作为提取芦丁的原料。 药理实验证明芦丁具有减少毛细血管的通透性作用，临床上主要用为防治高血压病的辅助治疗药物。芦丁可降低毛细血管脆性和调节通透性。临床上用作毛细血管脆性引起的出血症。此外，芦丁对于放射线伤害所引起的出血症亦有一定作用。 [目的要求] 1、通过芦丁的提取与精制掌握碱－酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2、得