色谱技术实验2014.docVIP

色谱技术实验 实验一 中药提取液HPLC梯度洗脱条件的优化………………………… 实验二 中药挥发油GC程序升温分析条件的优化…………………………… 实验三 混合染料TLC分离条件的三角形优化………………………………… 实验四 溶剂选择性对中药提取液HPLC分离结果的影响 实验一 中药提取液HPLC梯度洗脱条件的优化 一、目的 1．掌握高效液相色谱分析中，梯度洗脱条件的决定因素。 2．熟悉HPLC梯度洗脱条件优化的思路。 二、提要 对于成分复杂的中药提取液，测定其HPLC指纹图谱一般采用梯度洗脱的方法。而梯度洗脱条件主要受梯度范围（梯度起始浓度和终止浓度）、梯度斜度及强溶剂种类的影响。其中梯度范围和梯度斜度决定流动相的洗脱强度，可以通过调整梯度范围和梯度斜度，使样品组分的k’值符合1＜k’＜20范围；而强溶剂的种类决定流动相的选择性。本实验主要考察不同洗脱系统的溶剂强度对于梯度分离条件的影响。 三、实验条件 四、操作步骤 五、思考题 1．梯度洗脱中，如果色谱峰集中在整个分析时间的中间段，即在洗脱的开始和结束的时间里没有组分出现，应如何调整梯度范围？ 实验二 中药挥发油气相色谱分析条件的选择 一、目的 １．练习气相色谱仪的使用，了解气相色谱仪的基本结构。 ２．掌握柱温的变化对组分保留时间及分离度的影响。 ３．掌握程序升温对复杂样品分离度及分析时间的影响。 二、提要 对于宽沸程的样品分析，采用程序升温（单阶程序升温、多阶程序升温），在分析过程中柱温随时间而变化，通常是升高柱温。它的优点是减少分析时间。程序升温条件选择是确定初始温度、初始时间、升温速率、终止温度、终止时间。 三、仪器与试剂 四、操作步骤 五、思考题 程序升温的初始温度、终止温度及升温速率的对分离度会有什么影响？ 实验三 混合染料TLC分离条件的三角形优化 一、目的 1．掌握溶剂极性参数与展开剂洗脱强度之间的关系； 2．掌握溶剂的三角形分组对展开剂选择性的影响； 3．熟悉三角形优化法在TLC分离条件选择中的应用。 二、提要 溶剂与溶质分子之间主要考虑其偶极作用力和氢键作用力，按它们的大小，即给出质子的能力、接受质子的能力、偶极矩的大小，把常用的溶剂分为8类。处于同一组的溶剂，在色谱分离中具有相似的选择性；在分组三角形中相差较远的组中的溶剂，其选择性相差较大。为改善选择性，要根据组分的性质，选择合适的溶剂；而利用多元溶剂，既可调节K值，又可调节选择性。用统计方法可以帮助确定溶剂强度及选择性的多组分样品的分离条件，例如Glajch三角形优化法。 图4-1 溶剂选择性分类图 表4-1 溶剂选择性分类表 组别 溶剂名称 I 脂肪族醚、三烷基胺 II 脂肪醇 III 吡啶衍生物、THF、酰胺（除甲酰胺外）、乙二醇醚、亚砜 IV 乙二醇、苯甲醇、甲酰胺、乙酸 V CH2Cl2、二氯乙烷 VI 酮、酯、腈、聚酯 VII 卤代芳氢、芳氢、芳香醚、硝基化合物 VIII 水、氯仿、间甲苯酚、氟烷醇 表4-2 常用溶剂的溶剂参数 溶 剂 溶剂参数P’ 所属组别 正己烷 0.1 乙醚 2.8 Ⅰ 乙醇 4.3 Ⅱ 异丙醇 3.9 Ⅱ 正丁醇 3.9 Ⅱ 四氢呋喃 4.0 Ⅲ 乙酸 6.0 Ⅳ 二氯甲烷 3.1 Ⅴ 丙酮 5.1 Ⅵa 乙酸乙酯 4.4 Ⅵa 乙腈 5.8 Ⅶb 苯 2.7 Ⅶ 氯仿 4.1 Ⅷ 三、仪器与试剂 四、操作步骤 图4-2 溶剂系统三角形优化法 各实验溶剂的组成 ①～⑦为七个实验组的溶剂配比A/B/C 五、注意事项： 4