凝胶柱层析概要.pptVIP

凝胶的类型： Sephadex: 交联葡聚糖 Sepharose：琼脂糖凝胶 Bio-Gel P：聚丙烯酰胺凝胶分子筛 Sephacryl：用N，N-亚甲双丙烯酰胺交联的葡聚糖凝胶 核酸蛋白检测仪 返回 记录仪 返回 部分收集器 部分收集器 返回 返回 返回 密封圈 尼龙膜 装柱示意图 返回 * 柱直径——样品量 柱长——分离效果 * 操作压——流速 50 柱长 75 柱直径 * 保存：膨胀、半收缩、干燥。 实验十 凝胶过滤柱层析纯化碱性磷酸酶 一、目的要求 1.学习和掌握凝胶过滤层析分离蛋白质的原理与方法。 2.通过凝胶过滤柱层析对碱性磷酸酶进行纯化。 二、原理 凝胶过滤层析也称分子筛层析、分子排阻层析，是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。 内水体积Vi 外水体积Vo 柱床体积Vt 洗脱体积Ve Vt=Vo+Vi+Vg Ve=Vo+KdVi Kd=(Ve-Vo)/Vi Kd=0 Kd=1 0Kd1 Kd1 优点： 条件温和 b.操作简便 c. 损失少回收率高 d. 层析柱可反复使用 G-10 G-15 G-25 G-50 G-75 G-100 G-150 G-200 吸水量 （g/g干凝胶） 1.0 1.5 2.5 5.0 7.5 10.0 15.0 20.0 工作范围