代谢总论培训教案.ppt

头部F1相对分子质量（Mr）约为380 000，含有9个多肽亚基（α3β3γδε）。F0嵌合在线粒体内膜中，其中的10～12个c亚基形成一个环状结构，1个a亚基和2个b亚基位于环状结构外侧，及由γ亚基构成的跨膜质子通道。 F1的3个α亚基和3个β亚基交替排列，形成橘子瓣样的结构。γ和ε亚基结合在一起，位于α3β3的中央，构成可以旋转的“转子”，F1的3个β亚基均有与腺核苷酸结合的部位，并呈现3种不同的构象。其中与ATP紧密结合的称为β-ATP构象，与ADP和Pi结合较疏松的称为β-ADP构象，与ATP结合力极低的称为β-空构象。质子流通过F0的通道时，c亚基环状结构的扭动使γ亚基构成的“转子”旋转，引起α3β3构象的协同变化，使β-ATP构象转变为β-空构象并放出ATP。当β-ADP构象转变为β-ATP构象时，使结合在β亚基上的ADP与Pi结合成ATP。 构象变化学说可以解释ATP生成的机制，P.Boyer和J.Walke因此荣获了1997年的诺贝尔化学奖。 1964年提出构象偶联学说 1994年解析了F1-ATP酶的空间结构 （3）呼吸链中传递体的顺序 呼吸链中氢和电子的传递是有着严格的顺序和方向的。这些顺序和方向是根据测定各种电子传递体标准氧化还原电位（standard oxidation-reduction potential，Eo）的数值，并利用某种特异的抑制剂切断其中的电子流后，再测定电子传递链中各组分的氧化还原状态,以及在体外将电子传递体重新组成呼吸链等实验而得到的结论。 ① 标准氧化还原电位（Eo）决定了呼吸链中各组分的顺序 在氧化-还原反应中，如果反应物失去电子，则该物质称为还原剂；如果反应物得到电子，则该反应物称为氧化剂。氧化还原反应包括一个矛盾的两个方面，一种物质作为还原剂失去电子本身被氧化，则另一种物质作为氧化剂将得到电子被还原。物质得失电子的趋势可以用氧化还原电位E0值定量表示。 氧化还原物质与标准氢电极组成原电池，可测定其E0值。用于生物测量的标准条件为：参考半反应池的氢离子浓度1.07mol/L，氢气气压101.3kPa，标准还原电位人为地规定为 0.0 V，而样品半反应池中含有待测定样品的氧化型和还原型物质各lmol/L，pH = 7.0。电流表上的读数表示两个半反应池之间的电势差，即样品半反应池的标准氧化还原电位。 呼吸链各组分在链上的位置次序与其得失电子趋势的强度有关，电子总是从低氧化还原电位向高的电位上流动，氧化还原电位E0的数值愈低，即供电子的倾向愈大，愈易成为还原剂，而处在呼吸链的前面（标准氧化还原电位E0在pH7.0时用E0′表示）。因此E0′值决定了呼吸链中各组分的顺序。 Experimental apparatus used to measure the standard reduction potential of the indicated redox couples: (a) the acetaldehyde/ ethanol couple, (b) the fumarate/succinate couple, (c) the Fe3+/Fe2+ couple. 电势和自由能的关系 ΔG0′= －nFΔE0′ 标准电动势和平衡常数的关系 ΔE0 = (RT / nF)lnk ΔE = ΔE0+(RT/nF)ln{[ox]/[red]} ② 利用特异性呼吸链的抑制剂研究传递体的顺序 电子传递链上能阻断传递体的特异性抑制剂，为研究呼吸链上电子传递体的顺序提供了有价值的信息。例如抑制剂鱼藤酮（rotenone）和安米妥（amytal）可切断NADH和COQ之间的电子流，鱼藤酮是植物来源的杀虫剂，有极强的毒性。来自淡灰链丝菌的抗霉素A（antimycin）可切断细胞色素b至c链上的电子流，氰化物（cyanide，CN-）、CO （carbon monoxide）是阻断细胞色素aa3至氧的电子传递抑制剂，萎锈灵（Carboxin）可切断FADH2呼吸链中FADH2与COQ之间的电子流。 ③ 电子传递体的体外重组实验确认传递体的顺序 用分离出的电子传递体在体外进行重组实验也证明了NADH可使NADH脱氢酶还原，而不能直接使细胞色素b、c或a、a3还原。同样，还原型NADH脱氢酶不能直接与细胞色素c起作用，而需要辅酶Q和细胞色素b和c1的存在。另外，从线粒体中分离到一些功能上相关的传递体复合物也说明了各成分的顺序性，例如细胞色素b、