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实验报告 课程名称： 植物生理学实验（乙） 指导老师： 成绩：__________________ 实验名称： 叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定 实验类型： 实验目的和要求 了解改良半叶法、氧电极法测定光合作用和呼吸作用的基本原理，掌握红外线CO2分析仪法测定光合作用和呼吸作用，蒸腾速率和气孔导度测定的基本原理; 掌握用LI-6400测定光合作用、呼吸作用、蒸腾速率和气孔导度的方法，测定光-光合响应曲线的方法. 实验基本原理 （一）改良半叶法测定光合作用 （二）熟悉仪器基本结构，及按装调试。 以榕树和蚕豆等植物为材料，用LI-6400portable photosynthesis system测定它们的光合作用、呼吸作用、蒸腾速率和气孔导度及光-光合响应曲线，通过比较分析其属于什么光合类型植物。 Principles for measuring photosynthesis and respiration 6CO2+6H2O 6(CH2O)+6O2 测干重——改良半叶法：同面积光暗叶片重量差。使用三氯乙酸（TCA）涂抹在叶片叶柄处，阻断叶片在进行光合作用的时候向外输出营养物质。测定的为总光合作用量。 测放O2?——氧电极法。气相和液相。氧电极的原理：氧电极是由嵌在有机玻璃上的铂和银所构成，以0.5mol/L?KCl为电解质，电极头外覆盖一层聚乙烯或聚四氟乙烯薄膜，其厚度在15～25μm之间，用“〇”形套膜环固定，使电极与被测溶液隔离，而溶解在溶液中的氧仍能透过薄膜，进入电极内。较薄的膜易透过氧，因而对氧浓度变化的响应时间短. 红外线CO2分析仪法：CO2吸收4260nm红外线,有封闭式：单位时间内CO2下降量和开放式：参比室和叶室CO2差值?本实验将采用开放式测得。 三、实验材料与试剂 实验试剂：三氯乙酸（TCA） 实验材料：树叶、菜豆 实验器材与仪器 天平、湿毛巾、烘箱、打孔器、游标卡尺、剪刀、LI-6400 portable photosynthesis system 实验操作方法和步骤 （一）改良半叶法：光照不少于1.5h，注意测定打孔器内径（计算面积）。放入铝盒中，开盖放进烘箱后，下周实验时测定重量（如回潮，需再烘干）。 (二)CO2红外分析法（LI-6400便携式光合作用测定系统）测定瞬时光合速率、光响应曲线等。 打开叶室夹好叶片，关紧叶室，按１，F5（Match)?→?F5(IAGR?Match)，F1(exit)→开灯，按2,F5（Lamp?off）选Quantum?fluxenter,?输入光强值（500-1500?）enter?→按1，F1（Open?Logfile），命名文件名ＸＸＸ及附加标记（植物，处理，组号等）?enter?→观察?Photo稳定时，按采样键F1（ＬＯＧ）或测定器黑钮5次（一般同一叶片应测5次值）。? ?在完成采样（LOG）后，按５，按F1（AUTOPROG）,找Light?curve,?名命及做标记enter,按Y(使测量数据紧随上述数据后)。设置光强（从高到低，光强间用1空格隔开。高光强下点间隔大，低光强下点间隔小，常用2000?1500?1000?600?300?200?100?50?30?10?0，光强为0时为呼吸速率），设置测定装订线时间间隔的最小值和最大值，设置叶室和参比室间应进行自动匹配的CO2浓度，按Y开始自动测量。? 数据保存和取出。采样完后按１，Close?file,按F5，end进入SLEEP（同一班只需一个file，不同的组可以用add?mark区分)。与电脑连接，解除SLEEP，进入F5(Utility?Manu)选择File?exchange?mode。打开电脑winPX?for?6400,在LI-6400/User下把自己要的测定文件拖入专设目录。在EXCEL下选择所有文件在文本导向下，选择“，”打开。 实验数据记录和处理： 半叶法 光照下叶片重量 黑暗中叶片重量 光照时数 打孔器内径 0.396g 0.338g 1.5h 1.180cm 1.160cm 1.092cm 干重增加总数m=58mg 切取叶面总和S=1.028×10-2 dm2 CO2红外分析法 表1、饱和光下不同植物光合、呼吸和蒸腾速率、气孔导度及水分利用效率(平均值±标准差) Plants Pn (μmol.m-2s-1) R (μmol.m-2s-1) Tr (mmol.m-2s-1) SC(molH2Om-2s-1) WUE 菜豆（本组） 10.2880076 1.