生物技术制药课堂重点.docVIP

第一章绪论 ·生物技术（biotechnology）：是指将生物用于有价值产品的生产。 ·生物技术制药（biotechnology pharmaceutics）:用现代生物技术制造药物。 是指利用基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程、蛋白质工程等生物技术，来研究、开发和生产用于预防、治疗、诊断疾病的药物。 ·生物药物（biological drug）：从生物体中制取的各种天然活性物质及其人工合成或半合成的天然物质类似物。 ·生物技术药物（biotechnological drug）:利用现代生物技术生产的蛋白质或核酸类等生物药物。 ·现代生物技术的主要内容 基因工程技术 细胞工程技术 酶工程技术 发酵工程技术 ·生物技术制药的主要内容 基因工程制药 细胞工程制药 酶工程制药 发酵工程制药 ·基因工程技术：是将一种生物体的基因与载体在体外进行连接，然后转入另一种生物体内，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 ·细胞工程技术：包括细胞及转基因细胞的离体培养、繁殖、再生、融合以及细胞核、细胞器（如线粒体、叶绿体等）的移植与改建等操作技术。 ·酶工程技术：在一定生物反应装置中利用酶的催化作用，将相应的原料转化成有用物质的技术。 ·发酵工程技术：培养活细胞以取得生物体或代谢产物的技术。（抗生素、氨基酸、维生素） ·生物制药：从生物材料中提取、分离、纯化药物的过程。 基因工程制药 ·基因工程制药：是指利用基因工程技术生产蛋白质或多肽类药物。 ·基因工程药物制造步骤: 上游阶段：分离目的基因，构建工程菌，目的基因的表达。 下游阶段：从工程菌的大量培养到产品的分离纯化和质量控制。 ·分离纯化的步骤：细胞分离-细胞破碎-固液分离-浓缩与初步分离-高度纯化直至得到纯品-成品加工 ·基因重组蛋白的主要分离技术： 分离、沉淀（等电点沉淀法、盐析法） 、膜分离、双水相萃取。 ·基因重组蛋白的主要纯化技术: 1.离子交换层析 2.亲和层析 3.凝胶过滤层析(分子量大的先洗脱下来） 反相色谱和疏水色谱 ·亲和层析的主要步骤： a.配体固定化 b.亲和吸附阶段 c.洗涤阶段 d.洗脱解离阶段 e.再生阶段 ·凝胶过滤法的用途： 脱盐、分级分离、分子量的测定 ·反相色谱和疏水色谱：根据蛋白质疏水性的差异来实现分离纯化的。 ·基因工程药物的改造的目的：提高疗效降低毒副作用。 ·基因定点突变技术（site-directed mutagenesis）:能够在基因水平上对所 编码的蛋白质分子进行改造。 ·融合蛋白：在人工条件下将两个或多个基因的编码区首尾连接, 由同一调控序列控制构成的基因表达后所得的蛋白质产物称为融合蛋白 (fusion protein,FP)。 ·融合蛋白的作用：延长半衰期、降低清除率   ·选择分离纯化方法的依据 1.据产物表达形式来选择 2.根据分离纯化单元之间的衔接选择 3.根据分离纯化工艺的要求来选择 ·疏水层析和反相层析的区别: ·基因工程药物的修饰与改造： 1、构建突变体 2、融合蛋白 ·基因工程药物的质量控制项目： 1、蛋白质的含量测定 2、蛋白质的纯度检测 3、蛋白质Mr测定 4、蛋白质等电点测定 5、蛋白质序列分析 内毒素分析、宿主蛋白与核酸残留分析 ·蛋白质纯度的鉴定： 电泳法、色谱法、质谱法、 末端氨基酸残基分析法 ·蛋白质分子量测定: SDS－PAGE、凝胶色谱法、质谱法 ·内毒素分析、宿主蛋白与核酸残留分析 a.内毒素分析：鲎试剂、家兔体温。 b.宿主蛋白：免疫分析试剂盒。 c.核酸残留：核酸杂交法、PCR 方法和高亲和力DNA结合蛋白。 第三章 动物细胞工程制药 ·动物细胞生产药物的优缺点： 优点:有翻译后修饰，与天然产品一致;分泌胞外、纯化方便。 缺点:培养条件高、成本高、产量低。 ·体外培养动物细胞的类型： 贴壁依赖性细胞、贴壁非依赖性细胞（悬浮细胞）、兼性贴壁细胞 *显著污染的标志是：培养基的pH值迅速改变，细胞外形模糊。 ·动物细胞培养的环境条件：（无细胞壁，对环境条件非常敏感） 培养温度 pH值 通氧量 防止污染 基本营养物质 渗透压 ·实验室动物细胞培养的基本技术： 细胞的原代培养 细胞的传代培养 细胞克隆培养 动物细胞的冻存与