切点磷酸二酯键.pptVIP

4.切点： 3.结果： 黏性末端和平末端 DNA连接酶——“分子缝合针” * 限制酶 切点：磷酸二酯键 限制性核酸内切酶（来自原核生物） ——识别，切割DNA的特定核苷酸序列。 磷酸二酯键 DNA连接酶 DNA聚合酶 DNA酶 限制性内切酶 解旋酶 作用的 化学键 作用 物质 小DNA---大DNA DNA连接酶 磷酸二酯键 单位---DNA链 DNA聚合酶 DNA----单位 DNA酶 大DNA---小DNA 限制性内切酶 氢键 双链—单链 解旋酶 作用的 化学键 作 用 物 质 常用载体（多为人工改造）： 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等。 载体必须具备的条件： 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 4、对受体细胞无害。 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建（核心） 将目的基因导入受体 细胞 操作过程 目的基因的检测与鉴定 1、目的基因的获取： 从已有物种中直接分离， 人工合成（基因比较小，序列已知）。 2、获取方法： （1）从基因文库中获取目的基因。 （2）利用PCR技术扩增目的基因 （3）人工合成 95OC 55OC DNA 绿色是引物 72OC 高温变性 低温复性 中温延伸 *