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细胞工程知识点 细胞工程：以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。 细胞工程的应用： 动植物快速繁殖技术：植物组织培养、人工种子、试管动物、克隆动物 新品种的培育：细胞融合、细胞水平的重组 细胞工程生物制品：单克隆抗体制备、疫苗生产 细胞疗法与组织修复： 2细胞工程理论基础 细胞全能性：每个活的体细胞都具有像胚性细胞那样，经过诱导能分化发育成为一个新个体的潜在能力，并且具有母体的全部的遗传信息。 细胞分化：指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程。 细胞的脱分化：在一定营养和刺激因素作用下,具有特定结构与功能的植物组织的细胞被诱导而改变原来的发育途径,逐步失去原来的分化状态,细胞特性消失,转变为具有分生机能的细胞,并进行活跃的细胞分裂,这一过程称为去分化。 3细胞工程技术 实验室条件：组成：准备室、无菌间、操作间、培养室、分析室。 无菌技术、显微技术、细胞观察与分析、细胞分离、细胞保存与复苏 （1）细胞保存方法 传代培养保存法 低温冷冻保存法(低温、超低温保存) 液体固化的方式（形成冰晶、形成无定型的玻璃化状态） 玻璃化指液体转变为非晶态（玻璃态）的固定化过程，在此状态时，水分子没有发生重排，不产生结构和体积的变化，因此不会由于机械或溶液效应造成组织和细胞伤害，化冻后的细胞仍有活力。 冷冻方法（缓慢冷冻法、快速冷冻法 预冷冻法包括逐级冷冻和两部冷冻） 细胞复苏按一定复温速度将细胞悬液由冻存状态恢复到常温的过程。 复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化，以避免慢速融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞。 细胞培养和代谢调控： 细胞培养：模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。 细胞培养的操作方式：分批式培养、流加式培养、半连续式培养、连续式培养、灌流式培养。 分批式培养（植物细胞培养）：分批式培养过程的环境随时间变化很大，可分为延滞期、对数生长期、减速期、平稳期和衰退期等五个阶段。 流加式培养(适合植物）：随着营养物质的不断消 耗，不断地向系统中补充新的营养成分，使细胞进一步生长代谢，直到整个培养结束后取出产物。 半连续式培养（动物细胞）：定期取出部分培养物，或是条件培养基，或是连同细胞、载体一起取出。 连续式培养：该模式是将细胞接种 于一定体积的培养基后，为了防止衰退期的出现，在细胞达最大密度之前，以一定速度向生物反应器连续添加新鲜培养基；同时，含有细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出，以保持培养体积的恒定。理论上讲，该过程可无限延续下去。 灌流式培养：灌流式培养是把细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和产 物形成过程中，不断地将部分条件培养基取出，同时又连续不断地灌注新的培养基。（动物细胞） 代谢工程：通过某些特定生化反应的修饰来定向的改善细胞的特性，或是利用重组DNA技术创造新的化合物。它是利用基因工程或是分子生物学技术、将生物技术内的代谢路径改变，通常改变生体内化学反应的酶。代谢工程技术目前以微生物利用为主，改变工业微生物的代谢路径，生产所需要的化学物质，如抗生素。 逆代谢工程：是一种采用逆向思维方式进行代谢设计的新型代谢工程。就是先在异源生物或相关模型系统中，通过计算或推理确定所希望的表型，然后确定该表型的决定基因或特定的环境因子，然后通过基因改造或环境改造是该表型在特定的生物中表达。 植物人工繁殖 植物组织培养： 是指在无菌条件下，将离体的植物器官（如根尖、茎尖、叶、花、未成熟的果实、种子等）、组织（如花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞、生殖细胞等）、胚胎(如成熟和未成熟的胚)、原生质体等培养在人工配置的培养基上，给予适当的条件，诱发产生愈伤组织、潜伏芽，或者长成新的完整植株的一种实验技术。也称植物离体培养或试管培养。 植物组织培养再生植株的途径： .器官发生途径：离体培养的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根、不定芽等器官的过程 体细胞胚发生途径：从体细胞产生胚状体的过程 植物组织培养的问题：玻璃化、褐化问题、微生物污染问题。 玻璃化问题解决方案： 利用固体培养基,增加琼脂浓度，选择适当的碳源,提高培养基中蔗糖含量，从根本上降低培养基中的渗透势,造成细胞吸水阻遏,减少培养基中植物材料可获得的水分； 采用通气性好的封口材料如纱布、脱脂棉等代替聚乙烯塑料膜作为封口材料,可降有效低培养容器内部环境的相对湿度,减轻有害气体的积累,使植物光合作用顺畅。 非受伤的物理和化学协迫可以增加乙烯的合成。乙烯促进叶绿素分解及细胞的畸形发展。乙烯处理破坏膜的结构，解离细胞壁，细胞内积累有少量纤维素