转化和转染.doc

转化和转染 一、转化 转化（transformation）是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。该现象首先发现于细菌。 细胞 转化（transformation）是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。这现象首先发现于细菌，也是细菌间遗传物质转移的多种形式中最早发现的一种，它不同于通过噬菌体感染传递遗传物质的转导以及通过细菌细胞的接触而转移DNA的细菌接合。 转化的研究不但在理论上有重要意义，而且在基因工程中是将质粒或病毒载体引入宿主细胞的一种重要手段（见重组DNA技术）。它也可能为育种和遗传性疾病的基因治疗提供新的途径。 转化现象1928年英国学者F．格里菲思在肺炎双球菌中发现的。他把不产荚膜的无毒的粗糙型肺炎双球菌和加热杀死后的产荚膜的有毒的光滑型肺炎双球菌混合注射小鼠，发现小鼠意外地被感染致死，而且从小鼠的血液中分离出活的产荚膜的肺炎双球菌。不久又发现产荚膜细菌的无细胞抽提物同样能在试管中使不产荚膜的细菌变为产荚膜的细菌。1944年美国细菌学家O．T．埃弗里等从元素分析、酶学分析、血清学分析以及生物活性鉴定等方面证实了无细胞抽提物中引起肺炎双球菌荚膜转化的转化因子是脱氧核糖核酸（DNA），第一次为遗传物质是DNA而不是蛋白质提供了直接的证据。到目前为止，已经在流感嗜血杆菌（Hemophilus influenzae）、链球菌（Streptococcus）、沙门氏菌（Salmonella）、奈瑟氏菌（Ne－isseria）、根瘤菌（Rhizobium）、枯草杆菌（Bacillus subti-lis）、大肠杆菌（Escherichia coli）等几十种细菌中报道了转化现象，所转化的性状包括荚膜、抗药性、糖发酵特性、营养要求特性等等。它们的转化因子都是DNA。 染色体 转化过程包括有转化能力的染色体DNA片段的吸附、吸收和整合3个阶段。外源DNA首先吸附在细菌细胞表面的一些接受位点上。肺炎双球菌和枯草杆菌等细胞的接受位点没有专一性，它们能吸附同种的DNA，也能吸附大肠杆菌的DNA。流感嗜血杆菌的接受位点则只能吸附近缘细菌的DNA。DNA在和细菌刚接触时可以被洗去，在稳定吸附以后便不能洗去，但还能被核酸酶水解。DNA被细胞吸收以后便不能被外源的核酸酶水解。能吸附的DNA主要是双链状态的，在通过细胞膜进入细胞的吸收过程中DNA分子转变为单链，并以这种形式整合到细菌染色体上。整合过程又可以分5个步骤。外源基因整合后，通过基因表达使受体细菌的表型发生相应的变化。图中所示的转化模式至少对于肺炎双球菌和枯草杆菌来讲是正确的。 质粒DNA的转化和染色体DNA的转化有显著的不同。在一般情况下前者的转化效率远远低于后者。但如果先用一定浓度的钙离子处理大肠杆菌细胞，再用质粒DNA和染色体DNA对它做转化实验则情况恰好相反。此外，质粒DNA很容易进入去掉了细胞壁的细菌的原生质体，说明对它的吸收并不通过专门的接受位点；质粒DNA的转化过程没有整合这一环节。 许多因素可以影响转化效率。受体细菌和供体细菌的亲缘关系愈远则转化效率愈低，这主要是受吸附位点专一性和染色体的同源程度的影响。DNA分子的联会是供体DNA整合到受体DNA上的先决条件，联会一般只发生在同源染色体之间，而亲缘关系愈远则同源性愈低，所以转化效率也愈低。但细菌间染色体的某些部位如核糖体基因部位在进化过程中很少发生变化，而有些性状如红霉素抗性和链霉素抗性等都是由于与核糖体有关的基因发生突变而使核糖体蛋白结构改变的结果，所以如果所转化的是红霉素或链霉素抗性基因或者和它们紧密连锁的其他基因，则转化效率便较少受细菌的亲缘关系的影响。 同一种细菌也可以由于基因型的改变而改变转化效率。细菌的限制性核酸内切酶能够分解外来的DNA，所以如果用限制酶失活的突变型菌株作为转化受体时可以提高转化效率。通过筛选也可以得到转化效率显著下降的突变型，包括吸附能力、吸收能力和整合能力下降的突变型。某些转化效率降低的突变型对于紫外线格外敏感，这一性质也是许多丧失了DNA损伤修复能力和丧失重组功能的突变型的特性，可见转化过程中的DNA的整合和DNA损伤修复以及基因重组都涉及某些相同的酶。基因型完全相同的细菌可以由于生理状态的改变而改变转化效率。能够吸收外源DNA的生理状态称为感受态。许多细菌的感受态都在对数生长期的后期迅速出现，经过一段时间以后便消失。感受态的细菌和非感受态的细菌相比，转化效率可以高出万倍。 从处于感受态的肺炎双球菌和链球菌中曾分离出感受态因子。感受态因子是蛋白质，它能使非感受态细菌转变为感受态，并有一定的种族特异性。某些外界因素可以影响转化效率，例如一定浓度的钙离子