临床检验试剂AFU标准操作规程(SOP).docVIP

试剂标准操作规程 项 目 a-L-岩藻糖苷酶（AFU） 方 法 酶显色测定法 编写人 日期 审核人 日期 批准人 日期 文件分发部门和/或个人 本规程自 年 月 日起实施，每 年复审一次 医务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任 临床化学检验室 目 录 检测原理 标本采集与处理 2.1 受检者的准备 2.2 静脉采血 2.3 抗凝剂 2.4 标本处理 3. 试剂 3.1 试剂 3.2 校准血清 3.3 试剂与校准血清的稳定性 4. 仪器 5. 操作 6. 计算 7. 操作性能 7.1 精密度 7.2 准确度 7.3 灵敏度 7.4 可报告范围 7.5 特异性 7.6 干扰 8. 参考值 9. 临床意义 1. 检测原理 在酶的作用下，复合底物2-氯-4-硝基苯--a-L-岩藻糖苷分解为岩藻糖和2-氯-4硝基苯酚，2-氯-4硝基苯酚在405nm处有特异吸收，检测405nm处吸光度变化率，可测得AFU的活性值。 AFU 2-氯-4-硝基苯--a-L-岩藻糖苷-----------------------岩藻糖 + 2-氯-4硝基苯酚 2． 标本采集与处理 2.1 受检者的准备： 病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。 2.2 静脉采血： 除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。 2.3 抗凝剂： 血浆使用EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。 2.4 标本处理： 血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，置洁净试管加盖低温保存。 3．试剂 3.1 试剂： 本科使用北京利德曼生化技术有限公司AFU试剂盒，为液体单一试剂，各组分如下： 组 成 溶液的浓度 缓冲液 100mM 2-氯-4-硝基苯--a-L-岩藻糖苷 3.2：校准血清 输入理论因数。 校准频次： 空白定标：每日需做试剂空白定标。 3.3 试剂与质控血清的稳定性： 原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。 试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。试剂颜色为无色，当试剂变色，按照试剂失效处理。 AFU专用质控血清在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。 4．仪器 YY型号仪器。 5．操作 样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为速率法。参数见后附，附录A。 试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。 6．计算 AFU (U/L) = ΔA/min×F 7．操作性能 7.1 精密度： 批内CV 1.97%，批间CV2.54%。 7.2 准确度： 测量结果在利德曼质控血清靶值±2SD范围内。不同方法学试剂的质控结果之间会存在差异，使用时请确保质控选择与试剂的方法学保持一致。 7.3 灵敏度： AFU浓度为：85U/L时，吸光度变化率ΔA405nm/min为0.079。 7.4 可报告范围： 血清与试剂用量之比为225：25时，测定上限为300 U/L。 7.5 特异性： 测量值在给定值的95%-105％范围内。 7.6 干扰： 内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。 8．参考值 0-40 U/L。 9．临床意义 本试剂盒用于检验血清中AFU活性。AFU为溶酶体酶，参与不同种类的多种正常代谢的岩藻糖苷复合物的降解反应。血清中AFU 的活性是肝癌诊断的重要指标。AFU的偏高可用于肝癌的早期诊断。虽然AFP (甲胎蛋白) 早已用于肝癌的诊断，但在特异性和敏感度上还存在很大的缺陷，40%的早期患者和20%的晚期患者，AFP的检测结果正常。而在AFP阴性的原发性肝癌病人中，大约有70-85%出现AFU 阳性结果。经现代医学认证：AFP和AFU的联合使用，使肝癌诊断的特异性和敏感度有了显著的提高。特别值得推荐的是，AFU对小型肝癌肿瘤的诊断尤其具有重大意义。