侧脑室注射秋水仙碱对小鼠学习记忆的影响-4.13.ppt.pptVIP

侧脑室注射秋水仙素对小鼠空间学习记忆的影响 华中师范大学动物学生理实验室 一、实验原理 秋水仙素，因最初从百合科植物秋水仙中提取出来而得名，也称秋水仙碱。纯秋水仙素呈黄色针状结晶，熔点157℃。易溶于水、乙醇和氯仿。味苦，有毒。秋水仙素能抑制有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期。在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍。自1937年美国学者布莱克斯利（A.F.Blakeslee）等，用秋水仙素加倍曼陀罗等植物的染色体数获得成功以后，秋水仙素就被广泛应用于细胞学、遗传学的研究和植物育种 。 秋水仙碱是一种微管聚合阻断剂，通过结合微管蛋白上特定位点的半胱氨酸，阻断微管蛋白聚合成微管，并引起原有微管解聚。神经元轴突和树突由微管组成，阻断微管结合可造成神经元功能障碍。学习记忆是大脑的一种重要功能，是一个极其复杂的信息收集、加工、整合过程，脑神经元结构和功能的完整性是学习记忆的基础，神经元功能障碍可对学习记忆功能产生严重影响。 二、实验目的 1.通过本实验了解和掌握侧脑室在脑部的位置，立体定位仪的使用方法。 2.Morris 水迷宫技术秋水仙碱对学习记忆的影响。 三、实验材料 【实验对象】小鼠 【实验材料】立体定位仪、微量进液器、0.48%戊巴比妥钠、15ug/5ul秋水仙碱、人工脑脊液（ 147 NaCl, 2.9 KCl, 1.6 MgCl2, 1.7 CaCl2 and 2.2 dextrose in mM ） 手术器械、电子称等 四、方法和步骤 1.在电子称上称量小鼠体重， 0.48%戊巴比妥钠（0.02ml/g）腹腔注射麻醉小鼠。 2.剪去头部毛发，用镊子提起头部皮肤，手术刀做约2cm中央纵行切口，暴露头骨。用脱脂棉蘸取30%双氧水擦除头骨表面组织，暴露前囟位置。 3.将小鼠固定在立体定位仪上，根据侧脑室坐标：前囟后2.0mm，左右旁开1.5mm，硬脑膜下2.0mm。用钻头钻开此处头骨，微量进样器针尖接近骨膜后进入硬膜下2.0mm，缓慢注入2ul秋水仙碱，注射完后停留2min，以待液体能很好的渗入侧脑室。 4.注射完成后，取下小鼠，缝合手术切口，75%酒精消毒后，局部撒上链霉素粉剂。 立体定位仪 如右图：立体定位仪由耳棒、压鼻环、和三维操纵杆等组成。 右侧脑室位置 前囟后2.0mm，左右旁开1.5mm，深度2.0mm。大致位置如右图所示。 小鼠固定于立体定位仪上 小鼠头部固定：将小鼠的门齿固定于脑定位仪上颌固定器，然后把一侧的耳捧推入动物的外道后，使动物的头部处于两滑道正中。再将另一耳捧推入另一侧的外耳道。观察两个耳棒的刻度一致后，将两耳棒上的固定螺丝扭紧，在将牙齿固定器上压鼻环压下后扭紧（鼻环、耳棒的松紧度调节适宜为好），此时从各个方向推压动物头部均不会出现移动。 五、注意事项 1.操作过程中，注意保持小鼠体温，麻醉状态下，小鼠体温过低易死亡。 2.定位时要读数准确，钻孔时不要偏移，不要钻破脑组织。 3.注射药物时速度要缓慢。 思考题 1.如何用实验的方法检测侧脑室定位的准确性？ 2.秋水仙碱有何生物学作用，可应用于哪些生物领域？ 参考文献： 1. Colchicines-induced neurotoxicity as an animal model of sporadic dementia of Alzheimer’s type. Pharmacological Reports.2007,59:274-283.?? 2.??Neuroprotective effect of carvedilol, an adrenergic antagonist against colchicine induced cognitive impairment and oxidative damage in rat. ??Pharmacology, Biochemistry and Behavior.??2009, 92: 25–31.???? ?? ???? * * 耳棒 压鼻环 操纵杆 注意使小鼠头与身体处于一个平面上，以利于小鼠进行呼吸。 *