发酵豆粕品质检测方法适用性教材分析.ppt

3.1 大豆低聚糖 标准品棉籽糖与水苏糖的液相色谱图 保留时间：棉籽糖 7.462min 水苏糖 12.002 min 发酵前原豆粕中棉籽糖与水苏糖的液相色谱图 保留时间：棉籽糖 7.447min 水苏糖 11.917 min 峰高：水苏糖 2.10cm 水苏糖 棉籽糖 3.2薄层层析 4.大豆多肽 大豆多肽定义： 以大豆，豆粕或大豆蛋白为主要原料，用酶解法或微生物发酵法生产的，分子量分布在10000Da以下的肽称为大豆多肽。能够指示豆粕蛋白质的水解状态。 4.1大豆多肽分析方法 由于精确分析难度大，一般以三氯乙酸-可溶性氮指数 (TCA-SNI)和水解度(DH)表示。 对蛋白质水解由于存在内切酶和外切酶的差距，上述方法不能完全准确预示一个混合蛋白质或饲料原料蛋白质水解状况。 4.1.1三氯乙酸-可溶性氮指数 (TCA-SNI)的测定 将发酵豆粕水溶液与浓度为10%的三氯乙酸以1: 1比例混合，4500 r/min离心10 min后取上清液用凯氏定氮法测定。 4.1.2水解度(DH)的测定 蛋白质水解度 (DH) 的定义为水解过程中打开的肽键占蛋白质肽键总数的百分比，采用甲醛法测定 。 温度对DH和TCA-SNI的影响 大豆蛋白质肽链分子量主要分布在40000-70000之间，平均约为55000。以此推算，氨基酸残基数约为458（氨基酸平均分子量取120），有457个肽键，若水解度为10%，即有45个肽键被分解，产生46个分子，其平均分子量为55000/46=1195，其水溶性指数理论上是100%，与上述40%相差甚远。 4.1.3 酸溶性氮指数法 1、发酵豆粕水溶（蒸馏水，一般按1：5）， 调至pH=4.5，并于12000rpm离心10min（或过滤），取上清检测。 2、采用凯式定氮法检测上清中氮的含量（a）： 3、直接取上清液（不消化）检测无机氮（主要是铵态氮） （b）； 4、样品中多肽量的计算 多肽量=（a-b）*蛋白质换算系数 4.2发酵豆粕多肽含量 液体酶解条件下，在底物（大豆蛋白）和蛋白酶都过量情况下，大豆多肽含量最高在6.5%-7.0%。 固体发酵由于受到水分限制，发酵豆粕产品的多肽含量理论上不会超过10%。 有些产品超过10%，是非蛋白氮较高，或者加入氨基酸生产废液废渣。 底物浓度与多肽含量的关系 5、胰蛋白酶抑制剂的测定（GB/T 21498-2008） 原理：胰蛋白酶抑制剂能够和胰蛋白酶结合，通过测定底物（BAPA）被未结合的胰蛋白酶酶解生成的产物――对硝基苯胺溶液的吸光度，然后以它和未加抑制剂的标准吸光度之差来表示被抑制的胰蛋白酶活性。 6、植酸含量的测定 原理：用分光光度法测定用过量的Fe3+与植酸反应后的上清液中剩余Fe3+，从而间接测定植酸含量。 、 7、脂肪氧化酶活性的测定 原理：利用豆粕中的脂肪氧化酶与不饱和脂肪酸 ——亚油酸反应，测定反应物的吸光值大小来表示酶活的大小。 、 9、 脲酶活性的测定 原理：将粉碎的豆粕与中性尿素缓冲溶液混合,在30℃保持30min, 尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量盐酸中和所产生的氨,再用氢氧化钠标准溶液回滴。 10、 致甲状腺肿素含量的测定 原理：在有水介质存在的情况下，大豆中的硫代葡萄糖苷与同时存在硫代葡萄糖苷酶发生水解，在pH＝7的条件下，主要生成异硫氰酸酯（ITC），带羟基的ITC极不稳定，在极性溶液中自动环化成恶唑硫酮（OZT），在紫外区245nm处具有特征吸收峰，可灵敏地检测到。 11、 大豆凝血素的测定 原理：大豆凝血素与红血球有特异性凝血反应，细胞凝集从悬浮液中析出。可根据凝血反应强度，用凝血效价表示凝血素的含量。 发酵前豆粕血凝素在1：20480上有凝集反应 发酵后豆粕血凝素没有发生凝集反应 发酵前后豆粕营养成分比较研究 抗营养因子 发酵前含量 发酵后含量 胰蛋白酶抑制剂(TIU/mg) 1870.00 300-500 植酸(mg/g) 10.69 1.5-2 尿酶活性 0.35 0.02 脂肪氧化酶(OD234nm) -