发酵工艺学教材分析.ppt

* 3．双酶法生产肌苷酸和鸟苷酸（I+G）。 呈味核苷酸的主要品种是肌苷酸钠和鸟苷酸钠，商品名称为（I+G），用核酸酶P1降解RNA可获得GMP和AMP，其中AMP经脱氨生成IMP。 双酶法生产肌苷酸和鸟苷酸的工艺流程 参见吴梧桐主编，p330 4.菌体自溶法生产核苷酸 磷酸二酯酶在合适的条件下降解细胞内的RNA可产生5′-核苷酸。在国内用谷氨酸产生菌体自溶法生产5′ -核苷酸。工艺流程如下： 5．碱水解法生产2 、3 -混合核苷酸。 用酶法降解RNA得到的是5’-核苷酸，可用于生产呈味核苷酸。 2’、3’ -混合核苷酸在医药上有它的特殊用途。对血小板减少，白血球减少症和癌症化疗后升白血球均有较好疗效。 用碱水解RNA 可产生2’、3’ -混合核苷酸。实际上，是由于稀碱水解过程中，先形成一个中间环状物2’、3’ –环状核苷酸，它很不稳定，进一步水解生成2’，3’ –核苷酸。 （二）发酵法生产核苷酸 IMP生成总反应过程 ①SAMP合成酶 ③IMP脱氢酶 ②SAMP裂解酶 ④GMP合成酶 AMP和GMP的生成 SAMP （二）发酵法生产核苷酸 （二）发酵法生产核苷酸 1.发酵法生产肌苷酸（IMP） 肌苷酸钠是一种高效增鲜剂，在谷氨酸钠中添加2%，鲜度可以增加3倍。因此在味精中添加肌苷酸钠后成为第二代特鲜味精。 (1)产氨短杆菌嘌呤核苷酸生物合成途径，代谢调控和肌苷酸发酵机制。（参见吴梧桐主编，p333） 对5 ’ -IMP的生物合成来说，关键的酶是PRPP转酰胺酶，利用产氨短杆菌直接发酵法生产肌苷酸的关键： ①使用腺嘌呤缺陷型菌株。 ②提供亚适量腺嘌呤从而解除了对PRPP转酰胺酶的活性影响。 ③选育Mn2+不敏感性变异株 ④菌本身的5 -核苷酸降解酶活力低 2.发酵法生产黄苷酸（XMP）及酶法转化成鸟苷酸（GMP）。 鸟苷酸钠是比肌苷酸钠更强的增鲜剂，它还是三氮唑核苷和无环鸟嘌呤的原料，因此在食品工业和制药行业中需求量很大。 然而直接发酵生产GMP产量很低，没有生产价值。 黄苷酸（XMP）是鸟苷酸（GMP）的前体产物，可以通过累积黄苷酸（XMP），之后再用酶转化法生产GMP。 菌种A：丧失GMP合成酶的鸟嘌呤缺陷型和腺嘌呤缺陷型。 菌种B：5’-核苷酸分解力微弱，GMP合成酶活性强. 控制A、B菌接种比例，混合培养，大量产生XMP并高效转化成GMP。 （三）半合成法制备核苷酸 由于发酵法生产核苷的产率很高，因此可由发酵法生产核苷后经提取，精制再经磷酸化制取核苷酸。 方法：将核苷悬浮于磷酸三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷却条件下加入氯化氧磷，进行磷酸化。从核苷生成5‘-核苷酸收率可达90%。 核苷的制备 核苷是多种核苷类药物的原料，这些药物通常是生物自身能够合成的组成遗传物质的结构类似物，目前已用于临床的此类药物有几十种。 另外，核苷的发酵法生产水平大大高于同类结构核苷酸的发酵水平，因此肌苷酸钠，鸟苷酸钠可分别由肌苷和鸟苷经化学磷酸化方法合成，ATP由腺苷酯法合成。 （一）RNA化学水解法制备核苷 RNA以甲酰胺化学水解，树脂分离、结晶，可制得4种核苷。 （二）发酵法生产核苷 发酵法生产核苷是近代发酵工程领域中的杰出成果，产率高，周期短，控制容易，产量大。 菌种：枯草芽孢杆菌或短小芽孢杆菌变异株，嘌呤核苷分解活性低，而嘌呤核苷酸酶活性高。 枯草杆菌的嘌呤核苷酸合成途径。 ADP AMP GMP GTP GDP SAMP IMP XMP AMP脱氨酶 IMP脱氢酶 GMP还原酶 SAMP合成酶 PRPP AICAR SAICAR PRPP ATP SAMP裂解酶 GMP合成酶 （二）发酵法生产核苷 在右边的合成途径中，嘌呤核苷酸生物合成的第一个酶PRPP转酰胺酶受AMP、ADP、以及腺嘌呤衍生物的强烈抑制而受鸟嘌呤衍生物的抑制很弱。IMP脱氢酶受最终产物GMP及鸟嘌呤衍生物反馈抑制，SAMP合成酶受AMP反馈抑制的。 枯草杆菌的腺嘌呤缺陷型，当培养基中提供限量腺嘌呤时就累积肌苷。 而枯草杆菌的腺嘌呤、黄嘌呤缺陷型，当培养基中提供限量鸟嘌呤时就累积腺苷。 枯草杆菌的嘌呤核苷酸合成途径 PRPP转酰胺酶 1.发酵法生产肌苷（I或Iou） 肌苷生产菌（AJ11102）遗传性状： ①腺嘌呤缺陷型（A-）； ②GMP还原酶缺失（GMPred-）； ③磺胺脒抗性（SGr）； ④精氨酸缺陷型（Arg-）。 选育出从遗传上解除正常代谢控制的理想菌株。肌苷产率达20g/L. 1.发酵法生产肌苷（I或Iou） 工艺要点： ①保证培养基有充足N源。 ②短小芽孢杆菌受PO43-的抑制。 ③Mg2+、Ca2+ 对肌苷生产有促进作用。 ④提供的生长因子腺嘌呤或酵