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EM（有效微生物）组成的分类鉴定实验 研究思路：从 EM 原液中取出菌液，在适合不同菌种生长的固体培养基中分别培养分离，分离后的纯菌种接种到液体培养基中进行增殖培养，从而鉴定 EM有效微生物的组成。 1 实验材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 菌种来源 菌种来源：商品用 EM 原露，江西省天意生物技术开发有限公司产品。 1.1.2 培养基 ㈠微生物的营养物 微生物需要的营养物质有水、碳素营养源、氮素营养源、无机盐及生长因子。 ⑴ 水是微生物的组分，又是微生物代谢过程中必不可少的溶剂。它有助于营养物质的溶解和吸收，保证细胞内、外各种生物化学反应在溶液中正常进行。 ⑵ 碳源和能源：凡能供给微生物碳素营养的物质，称为碳源。碳源的主要作用是构成微生物细胞的含碳物质（碳架）和供给微生物生长、繁殖及运动所需要的能量。从简单的无机碳化合物到复杂的有机含碳化合物，都可作为碳源。例如，糖类、脂肪、氨基酸、蛋白质、脂肪酸、丙酮酸、柠檬酸、淀粉、纤维素、半纤维素、果胶、木质素、醇类、醛类、烷烃类、芳香族化合物、氰化物（如氰化钾、氰氢酸和丙烯脯）、各种低浓度的染料等。少数微生物还能以 CO2 或 CO3 中的碳素为唯一的或主要的碳源。可见自然界中蕴藏着丰富的碳源。微生物最好的碳源是糖类，尤其是葡萄糖、蔗糖，它们最易被微生物吸收和利用。许多碳源可同时作能源。 微生物细胞中的碳素含量相当高，占干物质质量的 50%左右。可见，微生物对碳素的需求量最大。根据微生物对各种碳素营养物的同化能力的不同，可把微生物分为无机营养微生物和有机营养微生物两种。凡是有光合色素的微生物，例如藻类、光合细菌及原生动物中的植物性鞭毛虫，均属于无机营养微生物。大部分细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、病毒等属于有机营养微生物。无机营养也称无机自养。这一类型的微生物具有完备的酶系统，合成有机物的能力强，CO2、CO 或 CO3 中的碳素为其唯一的碳源，能利用光能或化学能在细胞内合成复杂的有机物，以构成自身的细胞成分。而不需要外界供给现成的有机碳化合物。因此，这类微生物又称自养型微生物。根据能量来源的不同，自养型微生物又分为光能自养型微生物和化能自养型微生物。其中，光能自养微生物能利用阳光（或灯光）作为能源，依靠体内的光合色素，利用 CO2 和 H2O 或 H2S 合成有机物，构成自身细胞物质。而化能自养型微生物不具有光合色素，不能进行光合作用。合成有机物所需要的能量来自于它们氧化 S、H2S、H2、NH3、Fe 等时，通过氧化磷酸化产生的 ATP。CO2 是化能自养微生物的唯一碳源。化能自养微生物有亚硝化细菌、硝化细菌、好氧的硫细菌（硫化细菌和硫磺细菌）及铁细菌。自养微生物有严格自养微生物和兼性自养微生物两种。有机营养微生物也称为异养微生物。这类微生物具有的酶系统不如自养微生物完备，它们只能利用有机碳化合物作为碳素营养的能量来源。糖类、脂肪、蛋白质、有机酸、醇、醛、酮及碳氢化合物、芳香族化合物等都可作为异养微生物的碳素营养。异养微生物有腐生性和寄生性两种，前者占大多数。异养微生物又分光能异养微生物和化能异养微生物。光能异养微生物是以光为能源，以有机物为供氢体，还原 CO2，合成有机物的一类厌氧微生物，也称为有机光合细菌。化能异养微生物是一群依靠氧化有机物产生化学能而获得能量的微生物。它们包括大多数的细菌、放线菌及全部的真菌。混合营养微生物是既可以利用无机碳（CO2、CO 或 CO3 等）作为碳素营养， 又可以利用有机碳化合物作为碳素营养，即为兼性自养微生物。例如，氢细菌属（Hydrogenmonas）、贝日阿托氏菌属（Beggiatoa）、发硫菌属（Thiothrix）、亮发 菌 属 （ Leucothrix ）、 新 型 硫 杆 菌 （ Thiobacillius ）、 反 硝 化 硫 杆 菌（Thiobacillus denitrificans）、上述细菌既可以 S、H2S 为能源，也能以低浓度的乙酸钠、琥珀酸及葡萄糖为能源和碳源。据报导，硝化细菌的某些株能以乙酸为碳源。 ⑶ 氮源：凡是能够供给微生物氮素营养的物质称为氮源。氮源有 N2、NH3、尿素、硫酸铵，硝酸铵、硝酸钠、氨基酸和蛋白质等。氮源的作用是提供微生物合成蛋白质的原料。根据对氮源要求的不同，将微生物分为 4 类。固氮微生物：这类微生物能利用空气中的氮分子（N2）合成自身的氨基酸和蛋白质。如固氮菌、根瘤菌和固氮蓝藻。利用无机氮作为氮源的微生物：能利用氨（NH3）、铵盐（NH4 ）、亚硝酸盐（NO2 ）、硝酸盐（NO3 ）的微生物有亚硝化细菌、硝化细菌、大肠杆菌、产气杆菌、枯草杆菌、铜绿色假单胞菌 、放线菌、霉菌、酵母菌及藻类等。需要某种氨基酸作为氮源的微生物：