ERP9131总大肠杆菌(多管发酵技术).docVIP

方法91 3总大肠杆菌(多管发酵技术) 1.0适用范围 l 1.1本方法用于测定地下水和地表水中存在的大肠杆菌类细菌 | 1.2按本方法分析的大肠杆菌类细菌，其定义为：所有能于35℃在48h之内使乳糖 2.0方法摘要 2.1多管发酵技术是一种分三步进行的试验方法。结果经统计处理以最可能数(MPN)表示下面摘要介绍这三个步骤：假定试验、确信试验和完成试验(为了使分析)。 2.1.1假定试验：用累进量的待测水样接种到一系列月桂酰胰蛋白液态培养基初步 35±0.5℃培养24±2h，检查试管内有无气体生成。继续培48±3h结束时再行检查在48±3h内只要有气体生成，不 I 2.1.2确信试验：在24和48h内显示有气体生成的所有初步发酵试管均应进行确信35±0.5℃培养48±3h在这段时间内的任何时刻有气体生成即表明为阳性确信试验 2.1.3完成试验：在确信试验中显示阳性结果的所有水样均应进行完成试验对分 20％进行完成试验，还可作为一种质量控制手段在一个或数个伊红 35±0.5℃培养24±2h培养 (即有菌落核心、具有或没有金属光泽)转移到月桂酰35±0.5℃培养242h；如无气体产生则继续培养至48±3h对于有气体生成的发酵试管，取其相应的琼 2.2关于本方法的详细内容，请见水和废水标准检验法和环境监测的微生物学方法 3.O干扰 3.1细菌在水中的分布是无规律的因此，为了获得足够的统计准确度，本方法要 3.2存在余氯或其它卤索可妨碍细菌作用的持续为防止现这种问题，应在无菌 3.3水样中含有高浓度铜、锌或其它重金属可使细菌中毒。只有在怀疑水样中存在(EDTA)。 3.4必须牢记最可能数表为概率计算结果因而其精密度必然较差最可能数表23％的正系统误差通常会导致数值偏高。增加所分析的同一 4.O仪器和设备 4.1培养箱 4.1.1 培养箱内所有位置的温度在任何时间都必须保持均匀和稳定，即使用区域内0.5℃。为了达到这种恒温准确度，应使用带恒温水套的或无水型培养75％～80％ 4.1.2另外也可2.5cm问距 4.1.3培养箱内每一个正在使用的架子上，应放置一支准确的温度计，其球部浸入(甘油、水或矿物油)；记录每天的温度数(最好是在早晨和下午读数)另外，在培24h内的温度总范围培养箱满载时，应定时测定箱内的温度变化只要有可能，就应安0.5℃，每年应对照国家标准局(NBS)检定合格的温度计校准一次刻度盘温度计应每 4.1.4水浴中的水应保持足够深，能没过试管内的培养基液面 4.2干热灭菌箱应使用尺寸足够大的干热灭菌箱，以防内部拥挤灭菌箱的构造(170±10℃)，应配备适用的温度计或温度记录仪表 4.3高 4.3.1应使用尺寸足够大的高压灭菌器，以防内部拥挤。灭菌器的构造应能保证灭(直至并包括灭菌温度121℃)；应配备准确的温度计，其球部应正确地(也可使用温度记录仪表)；应配备压力(不要使用用胺处理过的锅炉供给的蒸汽，以防腐蚀)；灭菌器应能在30min内达到所需 I 4.3.2由于调节和保持灭菌温度的困难和潜在的危险建议不使用立式高压灭菌器2.5cm。 4.4茵落计数器使用魁北克(Quebec)式菌落计数器，最好为暗视野型；也可使(1.5倍)和令人满意的可见度 4.5 pH计准确度不低于0.1pH单 4.6天平使用负载为150g时感量不低于0.1g的天平称取少量(少于2g)时 使用负载为10g时感量为lmg的分析天平最好使用单盘快称天平 4.7培养基制备器皿使用硼硅玻璃或其它抗腐蚀材料如不锈钢器皿使用的玻璃 4.8吸管和刻度量筒使用尺寸合适，能够准确、快速移取所需液量的吸管同一2.5％使用符合国家标准的刻度量筒 4.9吸管容器使用端面尺寸5～7.5cm的圆筒形或长约40cm的矩形铝盒或不锈钢(牛皮纸)不得用铜或铜合金罐或盒盛放吸管 4.10稀释瓶或试管 4.10.1使用耐热玻璃，最好是硼硅酸盐玻璃瓶或试管其密封玻璃塞或螺帽应配备 4.10.2不要用棉塞作塞子在稀释瓶或管壁上上擦不掉的记号可以用尺寸适当 4.11培替氏(Petri)培养皿使用尺寸约为100×15mm的玻璃或塑料氏培养(60×15mm)或紧盖平皿(50×12mm)灭菌培替(铝或不锈钢罐，不能用铜罐)中，也可在灭菌以前先用纸，最好(牛皮纸)包封 4.12发酸管和小管瓶只能使用10×75mm的发酵管测试产生的气体时，发酵管 4.13接种装使用由22号或24号镍合金(铬镍、镍铬或与之相当的合金)或铂3mm。用干热或蒸汽灭菌也可以使用一次性硬木