GH发酵培养实验方案.docVIP

rhGH工艺实验方案 工艺实验名称 rhGH发酵提高蛋白表达量培养实验 申请人姓名 辛鹏 杨江坤 申请时间 2011.9.27 实验目的 目前我公司rhGH菌体在裂解工序的蛋白表达量为9g/kg，为提高发酵菌体的蛋白表达量至10 g/kg，准备将发酵工艺控制参数进行调整，以增加单罐蛋白表达量，同时可以降低水、电、蒸汽、人工等生产费用支出，最终达到降低rhGH发酵生产成本，提高产量的目的。 实验背景 ⑴目前裂解工序有1批GH二盐蛋白表达量达到10 g/kg，批号为有3批GH二盐蛋白表达量达到9.5 g/kg以上，批号为 这几批的数据证明裂解二盐蛋白表达量达到10g/kg是可行的。 ⑵针对上述几批裂解反馈的信息，我们认为发酵工艺阶段的控制参数可作适当调整，已达到裂解二盐蛋白表达量达到10g/kg。 可行性分析 见附件 预期目标 计划通过3批GH发酵培养，达到裂解工序10g/kg蛋白量 的目的，并且各项参数可以稳定控制，保持批间的稳定。 5. 实验过程 为提高菌体收率，达到10g/kg蛋白表达量的目的，本次实 验4方面进行发酵培养控制，包括：设备、物料、控制参 数、培养时间4个方面，具体过程如下： （1）设备 设备名称 规格型号 生产厂家 使用地点 恒温摇床 4330 NBS 种子室 百级超净工作台 SW-CJ 天津津港净化设备厂 无菌室 UV1240型 上海精密仪器有限公司 发酵间 复式光学显微镜 YS100 Nikon 发酵间 150L发酵罐 D100 德国贝朗公司 发酵间 2000L发酵罐 D2000 德国贝朗公司 发酵间 生化分析仪 YSI2700 美国YSI公司 发酵间 离心机 Z-81 德国赛普 离心间 150L罐发酵培养基配方 磷酸二氢钠 69.7g 磷酸氢二钾 185.5g 硫酸铵 306.3g 硫酸镁 189.4g 柠檬酸三钠 61.3g 氯化钾 91.7g 葡萄糖 52.5g 酵母粉 126g 水解酪蛋白2（11号） 630g 异亮氨酸（12号） 24.5g 微量元素溶液TE 35ml 氯化铁溶液 35ml 泡敌 10ml 纯化水 70L 2000L罐发酵培养基配方 磷酸二氢钠 896g 磷酸氢二钾 2385g 硫酸铵 3938g 硫酸镁 2435g 柠檬酸三钠 788g 氯化钾 1179g 葡萄糖 675g 酵母粉 1620g 水解酪蛋白2（11号） 8100g 异亮氨酸（12号） 315g 微量元素溶液TE 450ml 氯化铁溶液 450ml 泡敌 130ml 纯化水 900L 2000L罐补料酪素配方 酵母粉 1265g 水解酪蛋白16147g 水解酪蛋白23254g 纯化水 定容至180L 2000L罐补料葡萄糖配方 葡萄糖 140kg 纯化水 定容至280L 工序 参数 参数范围 转种 OD 14.5 菌体形态 均一短杆且没有杂菌 发酵 温度 37±0.3℃ pH 7.0±0.1(拐点除外) PO2 葡萄糖 从转种到培养2小时每20分钟测一次糖, 要求残糖浓度 时间 残糖浓度(mmol/L) 0 ≥ 30分钟 1.95-0.503 40分钟 2.33-0.773 1小时3.5-0.963 1小时20分钟 3.97-1.14 1小时40分钟 3.0-0 2小时 0.5-0 从2小时到放罐,根据溶氧的实际情况,来调节糖流加的速度。 酪素 酪素泵流加功率为3%全过程不变 发酵培养时间16小时 实验培养过程 （1）、GH7月份看罐方法看罐，培养时间延长30min （包括3批GH发酵培养）； （2）、GHPO2、残糖适当调整；PO2控制范围：小拐前PO2 ≥25%，小拐后PO2最低点控制在15%以上，小拐结束至拐点最高PO2 控制在15%-35%；拐点最高至8h，PO2控制在25%-45%；8h至11h PO2 控制在35%-50%；11h- 16h PO2控制在45%-60%，补糖量最高17.5%； （3）、GHPO2按照GH制过程执行，补糖功率 最高18%。 实施时间： 实施时间 GH 1 2011.10.24-2011.10.25 GH 2 2011.10.26-2011.10.27 GH