HPLC高效液相色谱分析实验.docVIP

仪器分析实验报告 实 验 名 称： HPLC高效液相色谱分析实验 学 院： 专 业： 班 级： 姓 名： 学 号 指 导 教 师： 日 期： 2013-5-15 实验目的 了解HPLC的结构，了解仪器的开、关程序；了解流动相的制备和样品溶液的制备；知道仪器设备的运行程序的进行样品分析。液相色谱由泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，试剂瓶中的流动相被泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。仪器：美国安捷伦1200型HPLC、10μL的微量注射器 试剂：乙腈、重蒸水、磷酸、氰基布络芬流动相的准备流动相只有一组：氰基布络芬，经过脱气开机，色谱柱平衡当1完成后，开机，特色谱柱平衡。样品溶液的准备配置好氰基布络芬溶液，按要求选好滤纸的孔径大小。用低压过滤装置过滤，由于美国安捷伦1200型HPLC配有脱气装置，因此滤液无需事先脱气就可以进行分析。基线的查看由于仪器内部压力的变化可以引起基线的不断波动，因此，需等待压力稳定后，基线平稳才能进行进样。样品进样分析用25μL的微量注射器取20μL的氰基布络芬，微量注射器中不能有气泡，将微量注射器的针头插入注射器的孔时，打开微量注射器阀，将氰基布络芬注射进去后，迅速关闭阀门，抽出针头，等待仪器的分析结果。色谱柱的清洗分析工作结束后，要清洗进样阀中的残留样品，也要用适当的液体来清洗色谱柱。关机实验完毕后，关闭仪器和电脑。 -------未知物峰面积； ------标准物峰面积； 色谱柱长(L)、理论塔板高度(H)与理论塔板数(n)三者的关系为： 理论塔板数和色谱参数之间的关系为： 取平均值，计算得： =2min=1662.6498s =35.04500min=2102.7s =40.53167min=2431.9002s =2065.75s (P65色谱定量分析) h=45.78mV s 实验分析与讨论 由色谱图和计算结果可知，该实验做的还是比较成功的。 实验过程中要注意仪器在运行中不能进入气体，气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他 物质。不能用纯乙腈等作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新 的流动相中。