第九章核酸的分离与提纯技术总结.ppt

核酸的种类 脱氧核糖核酸（DNA）：细胞核，单链或双链  核糖体RNA 核糖核酸（RNA） 转运RNA 信使RNA 但无论哪核酸，在生物体中一般以核蛋白的形式存在， 因此，为了提取制备核酸，必须将核蛋白解联（即利用接联剂将核蛋白裂解为核酸和蛋白）并去除蛋白， 同时必须维持核酸的天然性状，不使核酸发生变性或降解， 操作上尽量简化操作步骤，缩短操作时间，以减少各种不利因素对核酸的破坏，同时要求去蛋白迅速彻底。 为了保证分离核酸的完整性及纯度，在实验过程中，应注意以下条件和要求： （1）尽量避免化学因素对核酸的降解 过酸或过碱以及其他化学因素将破坏多聚核苷酸链的磷酸二酯键，使核酸降解； 核酸（特别是RNA）在碱性溶液中十分容易降解. 因此抽提介质的pH常以5.5-9.0为宜。 （2）减少物理因素对核酸的降解 物理因素主要是机械剪切力，包括强烈震荡、搅拌、细胞突然置于低渗溶液中，以及让溶液快速通过狭长的孔道； 其次是冻融、高温煮沸和辐射等，均将导致核酸的降解。 机械剪切力主要破坏大分子量的线性DNA分子，而对分子量小的环状质粒DNA及RNA分子，破坏相对较小。 (3)防止核酸的生物降解 细胞内外各种核酸酶可作