第九章基因工程和基因组学-长江大学农学院.ppt

制作：王洪刚 李斯深 (五) 基因治疗 ◆利用基因工程技术，将特异基因导入并整合到具有遗传缺陷的患者的基因组中，以治疗遗传疾病的方法，通常叫做基因治疗(gene therapy)。 ◆目前最常用的方法是利用病毒DNA作载体，构建重组DNA分子，用病毒包装物包装后形成的重组去毒病毒感染患者的细胞，将正常基因整合到染色体上。 第二节 基因组学 ◆基因组学(genomics)： 　　是遗传学研究进入分子水平后发展起来的一个分支，主要研究生物体全基因组(genome)的分子特征。 ◆特点：是以基因组为研究单位，而不是以单个基因， ◆目标： 　　是认识基因组的结构、功能及进化，弄清基因组包含的全部遗传信息及相互关系，为最终充分合理利用各种有效资源，预防和治疗人类遗传疾病提供科学依据。 ㈠构建基因组的遗传图谱　 　　　　(genetic map)； ㈡构建基因组的物理图谱 　　　(physical map)； ㈢测定基因组DNA的全部序列； ㈣构建基因组的转录本图谱； ㈤分析基因组的功能。 基因组学的重要组成部分是 　　　基因组计划(genome project)， 大体上可分为： ◆人类基因组计划(human genome project，HGP) ： ◆水稻基因组计划(rice genome project，RGP) ◆模式生物基因组计划： 　　如酵母、线虫、果蝇、小鼠、家猪、拟南芥 第九章 基因工程和基因组学 第一节 基因工程(Genetic Engineering) 基因工程概述 限制性内切核酸酶 载体 基因的分离与鉴定 基因工程的应用 基因工程概述 ★遗传工程 广义 狭义： 细胞工程、 染色体工程、 细胞器工程等 基因工程 ★1、概念： 　　是指将一种或多种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿遗传并表达出新的性状。 基因工程概述 也称为DNA重组技术(DNA Recombination)、 　　　或　分子克隆(Molecular cloning) ★2、诞生： 　1971年，美国Smith,H.O.　等分离出一种 　　　　　限制性酶，可酶切病毒的DNA分子； 　1972年：Ｂerg, P.　等 实现不同酶切DNA片 　　　　　　段的体外连接； 　1973年：Cohen,s.等将体外重组的DNA 转入 　　　　　　大肠杆菌细胞并得以表达。 　 基因工程概述 ★３、基本过程： 基因工程概述 ⑴ 从供体细胞中分离出目的基因；(简称“切”) ⑵ 用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片断接到载体上，形成DNA重组分子(“接”)； ⑶ 借助细胞转化手段将DNA重组分子导入受体细胞(“转”)； ★３、基本过程： 基因工程概述 ⑷ 培养转化细胞，以扩增DNA重 组分子，使其整合到受体细胞 的基因组中（ “增”）； ⑸ 鉴定转化细胞，获得外源基因 高效表达的细胞（ “检”）； 由此可见，基因工程的操作过程可简化为： “切、接、转、增、检” 目的基因与载体连接(DNA分子重组) DNA分子重组 目的基因导入受体 二 限制性内切核酸酶 ★限制性内切核酸酶或限制性酶： 　　　　　　(restriction enzymes) 　　在细菌中此酶的功能是降解外来DNA分子， 以限制(restriction )或阻止病毒侵染。 该类能识别双链DNA分子中一段特异的核苷 酸序列，并将双链DNA分子切断。 二 限制性内切核酸酶 ★限制性酶据其作用特点，可分为两类。 ⑴第Ⅰ类限制性酶：每隔一段DNA序列随机切割双链 　　　　　　　　　　　DNA分子，没有序列特异性。 ⑵第Ⅱ类限制性酶： 　　　能识别一段特异的DNA序列，准确地酶切双链DNA 　　的特异序列。 　　　　其识别的序列是对称的，即在一条链中从5’到3’方向的序列，与其互补链从5’到3’方向的序列完全相同。这种序列称为回纹对称序列(palindrome)。 　三 载体 　　一个DNA片段只有与适合的载体(vector)DNA连接构成重组DNA后，在载体DNA的运载下，才可以高效率地进入宿主细胞(host cell)，并在其中复制、扩增、克隆出多个拷贝。 　　可作为DNA载体的有质粒、噬菌体、病毒、细菌或酵母菌人工染色体（BAC、YAC）等。 三 载体 ★作为载体DNA分子，需具备四个条件： ⑴具复制原点(ori)， 　　能携带的外源DNA片段独立地自我复制； ⑵具有多克隆位点，即具有多种限制性酶的 　　　　　切点，用于克隆外源DNA片段； ⑶至少具有一个选择标记基因； ⑷易从宿主细胞中回收。 1. 细