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生物芯片原理与技术 吴宏翔 Gene Company Ltd. 一、概念、分类及应用 （一）、 两 个 概 念 生物芯片 主要指通过平面微细加工技术在固体芯片表面构建的微流体分析单元和系统，以实现对细胞、蛋白质、核酸以及其它生物组分的准确、快速、大信息量的检测。 基因芯片 技术是通过微阵列技术, 将高密度DNA片段阵列通过高速机器人以一定的顺序或排列方式使其附着在如玻璃片等固相表面，以荧光标记的DNA探针，借助碱基互补杂交原理，进行大量的基因表达及监测等方面研究的最新革命性技术。 （二）、生物芯片分类及应用 微阵列芯片 （Microarray） 微型实验室芯片 (Lab-on-a-chip) 液体芯片 (Liquichip) Lab-on-a-chip 微型实验室芯片是通过在芯片上刻成微流路径从而将涉及生物检测的主要步骤—样品准备/生化反应/结果检测—整合在一张芯片上。 Liquichip Bead , Capture molecule , Analyte , Reporter molecule是构成liquichip 的4个主要部分。 Bead上带有两种荧光，根据这两种荧光的比例可以 将bead分为多种。目前已有48种，正在开发中。 Capture molecule : 作用相当于探针，能特异性的与被检测物结合。 Analyte: 样品中被检测的成分。 Reporter molecule: 带有荧光的报告分子，能特异性的与被检测物结合。 Liquichip 反应的一般步骤： 1.先将capture molecule 结合在bead 上， 2.将这种标记了的bead与样品反应。Capture molecule 可以与相应的 analyte 特异性的结合， 3.此时再加入荧光标记的，特异结合analyte的reporter molecule。 4.检测：用liquichip workstation 进行检测。原理是同时对bead和reporter molecule 上的荧光进行检测。从而确定被结合的analyte的种类和数量。 Liquichip技术特点描述 1．基于bead的这种固相反应技术，具有 灵敏度高、信号强度高、灵活性好、所需样品量少的特点。 2．与传统的蛋白芯片相比，有两大优势，反应速度更快，灵活性更好。 3．由于检测方法的特点，在大部分的实验过程中，都不需要洗脱步骤，省时，且不会破坏反应的动态平衡。 4．有配套的蛋白表达和纯化体系。（his-tag） Lquichip应 用 领 域： 蛋白质定量 蛋白质功能研究 蛋白表达谱分析。? 蛋白质与蛋白质、蛋白质与核酸相互作用的研究。包括：免疫分析、酶分析、受体-配基分析、蛋白质核酸相互作用分析分析。 微阵列芯片 蛋白芯片 基因芯片 蛋白芯片(Protein Chips) 蛋白芯片应用 免疫学分析 蛋白与蛋白之间相互作用 DNA与蛋白质分子相互作用 基因芯片 基因芯片是通过微阵列技术, 将高密度DNA片段阵列通过高速机器人以一定的顺序或排列方式使其附着在如玻璃片等固相表面，以荧光标记的DNA探针，借助碱基互补杂交原理，进行大量的基因表达及监测等方面研究的最新革命性技术。 微阵列技术巨大优势在于它可以并行地宏量获取生物信息，借助此技术发展的生物芯片则提供了以核酸杂交为基础的基因水平的表达监控，多态性研究和基因分型。从而使我们对基因表达调控有更深入的了解。 基因芯片 按内涵划分： cDNA芯片 Oligo芯片:25mer(affymetrix), 70mer(Operon)， 80mer（Clontech）, 按功能划分： 基因组芯片： 检测某一基因是否存在，若 存在，拷贝数是多少。探针是DNA. 表达谱芯片：确定基因表达的途径与表达产 物。探针是RNA或cDNA 测序芯片：通过探针与微阵列的配对分析获 得探针的序列结果。 基因芯片应用 基因表达检测 多态性分析 遗传图谱定位 基因分型 通过杂交反应测定序列 基因芯片应用领域 遗传疾病研究 癌症 家系遗传疾病 普通基因突变疾病 感染性疾病 药物筛选 动物植物遗传筛选育种 个人基因身份证 环境监测 （三）、生物芯片应用优势 高通量平行分析样品 自动化程度高省时省力 所需样品试剂少保护环境 成本低 生物芯片应用优势 生物信息数据累积 为