实验一紫外－可见分光光度计的性能检验.docVIP

　 一、实验目的 1.掌握紫外－可见分光光度计性能的检验方法 2.学会UV-1100型紫外－可见分光光度计的使用方法 二、实验原理 分光光度计的性能的好坏，直接影响到测定结果的准确程度。因此，要对仪器进行性能检查，以保证测定结果的准确性。 三、仪器和试剂 UV－1100型紫外－可见分光光度仪 石英比色皿（一对） 擦镜纸 K2Cr2O7溶液 KMnO4溶液 蒸馏水 四、实验内容及操作步骤 1. 比色皿的配对性 将蒸馏水注入到比色皿中，以其中一个比色皿作空白，在 440 nm波长处分别测定其他各比色皿中的透光率。 2.波长精度的检查 用KMnO4溶液的最大吸收波长525nm为标准，在待测仪器上测绘KMnO4溶液的吸收曲线，若测得的最大吸收波长在5251nm以内，则仪器的波长精度符合使用要求。 3. 重复性 以0.02mol/L的H2SO4溶液的透光率为100%，用同一K2Cr2O7溶液连续测定7次，求出极差，如小于0.5%，则重复性符合要求。 4.吸收值的准确度考察 取K2Cr2O7溶液，在以下波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，如下表所示，其相对偏差在1%以内，则吸收值的准确度符合要求。 波长/cm 235 （最小） 257 （最大） 313 （最小） 350 （最大） 吸收系数 123.0～126.0 142.8~146.2 47.0~50.3 105.5~108.5 五、思考题 1. 同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？ 2. 检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？ ?? 　 一、实验目的 1. 掌握测绘吸收曲线的方法 2. 学会测定吸收系数 二、实验原理 若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的λmax、λminλ (S)为一定值，且他们的数目也一定，从而为鉴别化合物提供了有力的证据。 百分吸收系数是指当溶液浓度为1%，液层厚度为1cm时，指定波长的吸光度。 即 三、仪器和试剂 UV－1100型紫外－可见分光光度计 石英比色皿（一对） 100ml 烧杯1 个 擦镜纸 95%乙醇（A.R） 丹皮酚对照品 四、实验内容及操作步骤 丹皮酚对照品母液的配制：称取丹皮酚对照品10mg，用95％乙醇溶解，定容至10ml，摇匀。吸取5ml于100ml量瓶内，用95%乙醇定容，作为母液备用，此溶液中丹皮酚的含量为0.005%。 1. 吸收曲线的测绘 吸取母液1ml于10ml量瓶内，用95％乙醇定容。此时，丹皮酚含量为0.0005%。将此溶液与空白溶液（95％乙醇）分别用两个相同的比色皿盛装后，放置在仪器的比色架上，按仪器使用方法进行光谱扫描，得到吸收曲线图。 2．吸收系数的测定 利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸光度，计算百分吸收系数。 ?? 　 一、实验目的 1.掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法 2.巩固紫外－可见分光光度计的操作方法 二、实验原理 黄酮类化合物分子结构中多含有羰基和羟基等结构，这些结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物。 铝盐比色法是指用三氯化铝或硝酸铝、亚硝酸钠同黄酮类化合物生成稳定的有色配合物，可用于定量分析。 三、仪器和试剂 UV－1100型紫外－可见分光光度仪 石英比色皿（一对） 5% NaNO2溶液 10% Al(NO3)3溶液 NaOH试液 芦丁对照品 槐花药材 其余试剂均为分析纯 四、实验内容及操作步骤 1. 对照品溶液的制备 精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品50mg，置25ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。（每1ml中含无水芦丁0.2mg）。 2. 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 3. 样品测定 取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。再加甲醇90ml，加热回流至提取液无色，移至100ml量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取3ml，至25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起依法测定吸光度，从标准曲线