中药活性指标成分阿克苷制备与鉴定.docVIP

附件1 中药活性指标成分阿克苷（Acteoside）的制备与鉴定 何江1，胡小鹏2，邱榕珠3,马文杰3，李涛2 深圳大学医学院 深圳大学生命科学学院 深圳大学化学与化工学院 摘要：本实验以苦丁茶木犀科植物紫茎女贞（Ligustrum purpurascens）acteoside）Acteoside），又名洋丁香酚苷（《中华本草》）、洋丁香苷(《中药辞海》)、毛蕊花苷、马鞭草苷、麦角甾苷等。1963年罗马大学，M. L. Scarpati首先报道从植物Verbascum sinuatum中分离到阿克苷（acteoside）广泛于双子叶植物中）（Labiatae15属41种，紫薇科（Bignoniaceae）4属5种，木犀科（Oleaceae）7属12种，列当科（Orobanchaceae）5属10种，玄参科（Scrophulariaceae）21属34种，马钱科（Loganiaceae）2属7种，马鞭草科（Verbenaceae）12属31种，车前科（Plantaginaceae）2属7种，爵床科（Acanthaceae）2属3种，木兰科（Magnoliaceae）1属2种，苦槛蓝科（Myoporaceae）1属1种，蓼科（Polygonaceae）1属1属，菊科（Compositae）1属1种，胡麻科（Pedaliaceae）1属1种，桔梗科（Campanulaceae）1属1种，胡椒科（Piperaceae）1属1种，苦苣苔科（Gesneriaceae）1属1种，蔷薇科（Rosaceae）1属1种，共计79属160种植物。现代药理研究表明具有多种生：抗氧化，抗病毒，保肝，抗肿瘤转移抗炎，降血脂，抗菌神经保护等。由于具有多种，临床应用前景。J―20C旋光光谱仪测定，紫外光谱用UV―210A型紫外光谱仪测定，红外光谱用IR―450型红外光谱仪测定，核磁共振谱用WH―400型核磁共振仪测定，FAB―MS用JAB―HS测定。 层析柱材料用硅胶，D101大孔吸附树脂，Sephadex LH-20。薄层层析用高效硅胶G板（HPTLC, silica gel, Merck）CHCl3―MeOH―H2O (7:3:0.5)。有机溶剂用甲醇，乙醇和氯仿等。 二、提取及分离 称量482.3 g干燥的苦丁茶紫茎女贞（Ligustrum purpurascens）10 L加热回流提取磨口器皿中，加入5 L MeOH，加热回流2小时后，静置放凉，然后过滤，得提取液H1；随后，再重复操作一次，得提取液H2 (提取流程见图1)。合并两次提取液H1和H2, 并减压浓缩，得甲醇提取物395.5 g。在甲醇提取物395.5 g中加入4L纯净水，充分搅拌混匀，然后静置一小时，滤出上清液，如此反复操作三次，将所得的上清液合并，并直接上D101树脂（1500 g）层析柱分离。D101树脂层析柱分别用纯净水、50%甲醇和甲醇洗脱，得到三组馏分：A (23.5 g)，B (57.8 g)和C (11.3 g)。所得A、B、C三部分，经TLC检测 [硅胶G，展开系统CHCl3―MeOH―H2O (7:3:0.5)],B部分含有阿克苷。 B部分（57.8 g）经硅胶层析，干柱切割法，得到三部分：E (7.8 g)、F (12.1)和G（31.5 g）。将含有阿克苷的F部分进行硅胶柱层析，以CHCl3―MeOH―H2O溶剂系统洗脱得到7组馏分（如图1所示）。其中F3部分（3.2 g）再进行一次硅胶柱层析分离，得到粗品M 2.8 g。粗品M再经Sephadex LH-20柱层析纯化得到M 1.9 g。 经色谱层析纯化得到的M (1.9 g)，其纯度进行高效液相(HPLC)检测。检测条件为： 仪器：安捷伦1200（Agilent 1200）高效液相仪 检测波长：227 nm 分析柱：C-18 column (Hypersil ODS, 250(4.6 MM 4. 柱温：4℃ 流速：1 ml/min 样品浓度：1 mg/ml 进样量：5 (l 洗脱条件：起始洗脱比例为H2O―acetonitrile (80:20,v/v);时间程序为0―25 min,洗脱比例由0―100% acetonitrile 97.3%。 四、结构鉴定 1．显色反应[3] 1）FeCl310 ml适量的甲醇中，用毛细管取样，并在硅胶TLC板上点样，用风筒将斑点吹干，然后用10% FeCl3水溶液在TLC上喷雾，此时观察到斑点呈墨兰色。 2）KOH水溶液显色：取少许M试样放入一小试管中，用甲醇溶解，然后滴加10% KOH水溶液二至三滴，溶液呈深黄色2．[(]D24―63.23 (c 0.348, MeOH) 3．(max (EtOH) nm，(log ()3所示） 在210―240 nm区间，出现22