缓冲液培养基配制课稿.doc

电泳缓冲液、培养基的配制 一、电泳缓冲液、染料和凝胶加样液的配制 1、50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液 成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L 2、5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液 成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L 3、1％溴酚蓝（bromophenol blue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 4、10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。 凝胶上样液（gel loading solutions）5、6×碱性凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18％聚蔗糖（400型）0.15％溴甲酚绿0.25％二甲苯青FF水 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.8g15mg25mg补足到10ml 6、6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15％聚蔗糖（400型）水 1.5ml 1％溴酚蓝1.5ml 1％二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.5g补足到10ml 7、6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.25％溴酚蓝0.25％二甲苯青FF15％聚蔗糖（400型）水 2.5ml 1％溴酚蓝2.5ml 1％二甲苯青FF1.5g 补足到10ml 8、6×甘油凝胶上样液（4℃贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50％甘油水 1.5ml 1％溴酚蓝1.5ml 1％二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）3ml 3.9ml 9、6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40％聚蔗糖水 1.5ml 1％溴酚蓝1.5ml 1％二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）4g 补足到10ml 10、10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.2％溴酚蓝0.2％二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1％SDS50％甘油 水 20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10％ SDS5ml补足到10ml ? 二、无机溶液配制 1、1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 2、1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 3、10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 4、10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 5、1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 6、8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到