人参多糖研究报告.doc

分光光度法测定东北人参中人参多糖含量 【摘　要】:目的:测定东北人参中人参多糖的含量,并建立人参多糖的含量测定方法。方法:采用紫外分光光度法,苯酚-浓硫酸比色法于波长486nm处测定吸光度。结果东北人参多糖含量为8.65% (n=3),平均加样回收率为100.37%, RSD=3.25%。结论:苯酚-浓硫酸比色法测定东北人参中多糖含量,方法简便、准确、稳定性好。 【关键词】:东北人参;多糖;紫外分光光度法;苯酚-浓硫酸比色法 东北人参广泛分布在我国的吉林地区，尤其是长白山地带有丰富的物产资源，人参为五加科植物Panax ginsengC.A.Mey的干燥根,在我国有着悠久的药用历史,主要含有人参皂苷、人参多糖、人参多肽及挥发油、多种氨基酸、脂肪酸及微量元素等有效成分。人参多糖对机体的免疫功能、造血功能以及在抗肿瘤和降血糖等方面均有较为肯定的药理学作用。由于人参多糖的来源不同,所以同一植物不同的提取方法获得的多糖,甚至人参多糖的不同组分的生物学活性差异甚大[1~5]。 一、方法原理 人参多糖经95%乙醇沉淀后，与苯酚-硫酸反应，生成有色物质，在490nm条件下，有色物质的吸光度值与葡萄糖浓度成正比。??二、仪器与试剂 2.1仪器： （1）?分光光度计?（2）?离心机?（3）?旋转混匀器?（4）?恒温水浴锅? 2.2试剂 （1）95%乙醇：950ml无水乙醇加水稀释至1000ml。?。?（2）?1.8?mol/L?H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。?（3）?20?g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。?（4）?葡萄糖标准液：称取500mg葡萄糖于称量皿中，105℃干燥4h至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。准确称取100mg干燥后的葡萄糖，用水定容至100ml，葡萄糖标准浓度为1.0?mg/ml。?（9）葡萄糖标准应用液：吸取葡萄糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡萄糖终浓度为0.1mg/ml。?三、分析步骤及计算 3.1样品处理?（1）?样品提取：称取人参样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热4h，趁热抽滤，弃去初滤液，收集余下滤液。 （2）?沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液10ml?，置于烧杯中，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用95%乙醇洗涤3次，离心后弃去上清液。上述残渣用4.0mL?1.8mol/L?H2SO4溶解，用水定容至100mL容量瓶中，混匀。即为待测样品。? （3）?测定人参多糖：准确吸取待测样品2.0ml，置于25ml比色管中，加入1.0ml苯酚溶液，10ml浓硫酸，沸水浴煮沸2分钟，冷却比色。从标准曲线上查得相应含量，计算人参多糖含量。?3.2?标准曲线制备：?精密吸取葡萄糖标准应用液0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml（分别相当于葡萄糖0.01，0.02，0.04，0.06，0.08，0.10），补充水至2.0mL，加入苯酚溶液1.0ml，浓硫酸10ml，混匀，沸水浴2分钟，混匀，沸水浴2分钟，冷却后用分光光度计在490nm波长处以试剂空白溶液为参比，测定吸光度值（A），以葡萄糖浓度为横坐标，A为纵坐标绘制标准曲线。? 3.3标准曲线的线性范围与最低检出限 线性相关系数在0.9991～0.9988之间 表1回归方程 序号 1 2 3 4 5 6 1 含量（ug） 10 20 40 60 80 100 吸光度 0.010 0.051 0.129 0.191 0.271 0.346 标准曲线 r= 0.9995 0.0037x-0.0024 2 含量（ug） 10 20 40 60 80 100 吸光度 0.012 0.047 0.141 0.201 0.277 0.359 标准曲线 r =0.9988 0.0038x-0.0025 3 含量（ug） 10 20 40 60 80 100 吸光度 0.014 0.050 0.142 0.225 0.313 0.391 标准曲线 r = 0.9997 0.0042x-0.0030 4 含量（ug） 10 20 40 60 80 100 吸光度 0.019 0.058 0.159 0.245 0.331 0.437 标准曲线 r =0.9994 0.0046x-0.0030 5 含量（ug） 10 20