乌索酸综述.docxVIP

枇杷叶中乌索酸提取分离纯化 前言：乌索酸(Ursolic acid)，又名熊果酸，五环萜类化合物，广泛存在于熊果，山楂，枇杷等34科108种植物中，乌索酸以游离形式或与糖结合成苷的形式存在于这些植物内[1, 2]。乌索酸具有特殊的气味，分子式为 C30H48O3，结构式见图1，分子量为 456.68，熔点 285~288 ℃。易溶于二氧六环、吡啶、甲醇、乙醇、丁醇、丁酮，在无水乙醇中得大而有光泽的棱晶，而在稀乙醇中得细得像毛似的针晶；微溶于苯、氯仿、乙醚、丙酮，不溶于水和石油醚[3]。图1 乌索酸结构式.枇杷属于于蔷薇科枇杷属植物，约有30多种。枇杷原产我国，同时我国也是世界上最主要的枇杷栽培国，栽培面积和产量占世界的2/3以上，主产于华东、中南、西南地区的福建、浙江、江苏、湖北等地，枇杷叶全年皆可采收。枇杷叶是一种传统常用中药，性微寒，味苦辛，止咳，清肺和胃，降气化痰，收载于历版中国药典供中医临床应用。枇杷叶含有多种五环三萜类化合物，其中乌索酸含量较高，为主要活性成分[4, 5]，而且相比其它含有熊果酸的中草药含量丰富。乌索酸生物活性及其应用乌索酸毒性低，具有广泛的生物活性，近年来发现，其在抗肿瘤、抗氧化、抗炎镇痛、抗病毒、降血脂和血糖方面的作用显著。同时，乌索酸及其衍生物还对病毒具有抑制活性。乌索酸的药理学活性越来越引起药物专家们的关注。1.1抗肿瘤作用乌索酸是有多种抗肿瘤活性的药物，其抗肿瘤谱广，对肿瘤形成生长各阶段具有预防和抑制作用。其抗肿瘤机制为：①诱导癌细胞的凋亡和分化；②能抵抗致癌物和抗癌物；③细胞周期阻滞作用；④抗氧化作用；⑤抑制新生血管形成；⑥增强细胞免疫功能；⑦癌细胞侵袭性下降[5-7]。此外还可以减少放、化疗之后对造血系统的不良损害[8]。Irene [9]等在研究乌索酸对人类黑色素瘤肿瘤细胞(A375)、胶质母细胞瘤(U87)、甲状腺未分化癌细胞(ARO)的增殖和分化的影响时发现乌索酸能够抑制肿瘤细胞内生逆转录酶(RT)的活动，内生逆转录酶是已被证明参与肿瘤细胞的增殖和分化控制的。Chiang[10]等发现乌索酸能抑制Burkitt淋巴瘤P3HR1细胞和慢性髓性白血病K562细胞的增殖。Chen[11]等研究发现，乌索酸明显下调食管癌细胞Eca-109的COX-2的表达，前列腺素E2表达也下降，抑制Eca-109细胞的生长，移植瘤细胞明显受抑。Tian[12]等研究表明，乌索酸可以通过下调COX-2及其产物PGE2，使Fas表达增加bcl-2表达下降来诱导肝癌HepG2细胞凋亡。1.2抗氧化作用人体内少量的自由基是维持正常生理功能所必须的重要物质。但随着年龄的增长 ，人体内清除氧自由基的物质如超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、维生素等逐渐减少，体内就会产生和积累过多的自由基，从而破坏细胞膜及蛋白质结构、导致脂质的过氧化，引起人体的衰老和各种疾病的产生。卢静[13]等研究表明乌索酸对超氧阴离子和羟自由基有明显的清除作用，乌索酸对超氧阴离子的最高清除率可达88.42%，对羟自由基的清除作用最高可达86.35%。1.3抗炎镇痛作用甲醛致炎模型是经典的慢性疼痛模型，主要被用来评价药物抗炎镇痛活性。王翔[14]等用昆明种小鼠建立了甲醛致炎模型，将乌索酸制备成纳米脂质体，腹腔注射给药。结果表明乌索酸具有抗炎活性，又可抑制慢性炎症疼痛。葛金芳等[15]用弗氏完全佐剂诱导佐剂性关节炎大鼠模型，将乌索酸灌胃给药，可不同程度地减轻大鼠原发性及继发性足肿胀程度，降低多发性关节炎积分等主要指标。Catherine[16]等进行了乌索酸与抗生素联合治疗痤疮的临床实验，取得了良好的治疗效果。1.4抗病毒作用Zhao[17]等研究了乌索酸对豚鼠巨细胞病毒的抗病毒效果，结果表明乌索酸可以抑制病毒的合成，抗病毒效果明显。Kong[18]等研究表明乌索酸能抑制丙肝病毒的NS5B RdRp活动，从而产生良好的抗丙肝病毒效果，目前已应用于临床治疗。1.5降血脂和血糖作用彭小英[19]等报道了乌索酸对由肾上腺、葡萄糖引起的小鼠血糖升高有明显的对抗作用；可明显降低四氧嘧啶糖尿病大、小鼠的血糖水平及降低大鼠血清甘油三酯升高的作用。De等[20]报道了从枇杷叶中分离的三菇酸类成分乌苏酸对糖尿病小鼠有降血糖作用，而且能降低正常家兔的血糖水平。枇杷叶中乌索酸的提取目前在枇杷叶中乌索酸的提取方面采用溶剂萃取法居多，此外也有文献报道了超临界流体法、超声波辅助提取法、酶法提取等方法。2.1溶剂萃取法溶剂萃取法又叫醇提凝析法。相廷英[21]等人的研究表明乙醇是枇杷叶中乌索酸提取的最佳溶剂。吕寒[22]等人报道了，在以乙醇为溶剂提取过程中，乙醇浓度对提取效率影响最大，乙醇浓度为 80% 时提取效率最高。李开泉[23]等人的研究表明，枇杷叶中乌索酸主要是以游离态形