有助于维持改善健康的血糖状况功能评价方法.docxVIP

有助于维持/改善健康的血糖状况功能试验项目、试验原则及结果判定1 试验项目1.1 动物实验分为方案一（降低胰岛损伤血糖升高风险模型）和方案二（降低胰岛素抵抗血糖升高风险模型）两种1.1.1 方案一（降低胰岛损伤血糖升高风险模型）1.1.1.1体重1.1.1.2 空腹血糖1.1.1.3 糖耐量1.1.2 方案二（降低胰岛素抵抗血糖升高风险模型）1.1.2.1体重1.1.2.2 空腹血糖1.1.2.3 糖耐量1.1.2.4 胰岛素1.1.2.5 总胆固醇1.1.2.6 甘油三酯1.2 人体试食试验1.2.1 空腹血糖1.2.2餐后2小时血糖1.2.31,5-脱水葡萄糖醇1.2.4糖化血清蛋白（果糖胺）和/或糖化血红蛋白1.2.5低密度脂蛋白胆固醇1.2.6 甘油三酯2 试验原则2.1 动物实验和人体试食试验所列指标均为必做项目。2.2 根据受试样品作用原理不同，方案一和方案二动物模型任选其一进行动物实验。2.3除对血糖升高模型动物进行所列指标的检测外，应进行受试样品对正常动物空腹血糖影响的观察。2.4人体试食试验应选择糖调节受损血糖偏高的亚健康人群。2.5在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。3 结果判定3.1 动物实验： 方案一：空腹血糖、糖耐量二项指标中一项指标阳性，且对正常动物空腹血糖无影响，即可判定该受试样品有助于降低血糖升高风险功能动物实验结果阳性。 方案二：空腹血糖、糖耐量二项指标中一项指标阳性，血脂（总胆固醇、甘油三酯）无明显升高，且对正常动物空腹血糖无影响，即可判定该受试样品有助于降低血糖升高风险功能动物实验结果阳性。3.2 人体试食试验：1,5-脱水葡萄糖醇无明显下降，空腹血糖、餐后2小时血糖、糖化血清蛋白（果糖胺）和/或糖化血红蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇指标均无明显升高，且餐后2小时血糖阳性，同时，1,5-脱水葡萄糖醇、糖化血清蛋白（果糖胺）和/或糖化血红蛋白指标中任一项阳性，对机体健康无影响，可判定该受试样品具有降低血糖升高风险功能的作用。有助于维持/改善健康的血糖状况功能评价方法1.动物实验1.1实验动物选用成年动物，选用小鼠（262g）或大鼠（18020g），单一性别，每组10－15只。1.2材料1.2.1试剂四氧嘧啶（C4H2N2O4·H2O ,纯度98% ,分子量160.08）、地塞米松磷酸钠注射液、葡萄糖或医用淀粉、血糖测定试纸或试剂盒，胰岛素、甘油三酯、总胆固醇测定试剂盒1.2.2 高热能饲料猪油10% 、蔗糖15% 、蛋黄粉15% 、酪蛋白5% 、胆固醇1.2% 、胆酸钠0.2% 、碳酸氢钙0.6%、石粉0.4%、鼠维持料52.6% 1.2.3仪器血糖仪、全自动生化仪、可见光分光光度计、酶标仪、天平。1.3剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组和一个模型对照组、一个阴性对照组，以人体推荐量的10倍（小鼠）或5倍（大鼠）为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，高剂量一般不超过30倍，必要时设空白对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。1.4实验方法1.4.1 正常动物降糖试验选健康成年动物按禁食3－5小时的血糖水平分组，随机选1个对照组和1个剂量组。对照组给予溶剂，剂量组给予高剂量浓度受试样品，连续30天，测空腹血糖值（禁食同实验前），比较两组动物血糖值。1.4.2降低血糖升高风险试验方案一1.4.2.1降低胰岛损伤血糖升高风险1.4.2.1.1原理四氧嘧啶是一种细胞毒剂，可选择性地损伤多种动物的胰岛细胞，造成胰岛素分泌减少，血糖升高，引起实验性糖尿病。1.4.2.1.2试验步骤购入成年动物，适应3-5天后，禁食4小时（自由饮水），测空腹血糖。按血糖水平、体重随机分为1个阴性对照组、1个模型对照组和3个受试物剂量组，每组15只。剂量组给予不同浓度受试物，阴性对照组、模型对照组给予溶剂，连续30天。其中第28天，当天给予受试物后，阴性对照组和各剂量组动物禁食4小时（自由饮水），测空腹血糖值及糖耐量，比较剂量组与阴性对照组之间空腹血糖、糖耐量各时间点及曲线下面积变化。第30天，当天给予受试物后，模型对照组和各剂量组动物禁食24小时（自由饮水），腹腔注射四氧嘧啶（小鼠90-95mg/kgbw用前新鲜配制）造模，剂量组继续给予受试物，5天后各组动物禁食4小时（自由饮水），测空腹血糖值及糖耐量，比较模型组对照组与阴性对照组之间空腹血糖、糖耐量各时间点及曲线下面积变化，空腹血糖、糖耐量差异均有显著性（p0.05），模型成立。在此基础上，比较受试物各剂量组与模型对照组之间空腹血糖、糖耐量各时间点及曲线下面积变化，必要时，剂量组继续给予受试物，10天后各组动物禁食4小时（自由饮水），测空腹血糖值及糖耐量。1.4.2.1.3糖耐量试验试验当天剂量组给予受试物