分子生物复习题.docVIP

1.模体及结构域的概念和主要特点 模体(motif)属于蛋白质的超二级结构，由2个或2个以上具有二级结构的的肽段，在空间上相互接近，形成一个特殊的空间构象，并发挥专一的功能。一种类型的模体总有其特征性的氨基酸序列。 结构域分子量大的蛋白质三级结构常可分割成1个和数个球状或纤维状的区域，折叠的较为紧密，各行其功能，称为结构域。 2.蛋白质变性的相关内容 蛋白质变性（protein denaturation）：蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变，也即有序的空间结构变为无序的空间结构，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失，这种现象称为蛋白质变性。变性后生物活性丧失溶解度降低粘度增加蛋白质变性后，分子结构松散，不能形成结晶，易被蛋白酶水解。变性作用并不引起蛋白质一级结构的破坏，而是二级结构以上的高级结构的破坏，变性后的蛋白质称为变性蛋白。 如果变性条件剧烈持久，蛋白质的变性是不可逆的。如果变性条件不剧烈，这种变性作用是可逆的，说明蛋白质分子内部结构的变化不大。这时，如果除去变性因素，在适当条件下变性蛋白质可恢复或部分恢复其天然构象和生物活性，这种现象称为蛋白质的复性（renaturation）。 3.利用了蛋白质带电性质、大分子性质分离纯化蛋白质的方法各有哪些？ （1）透析与超滤 透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。超滤法是利用高压力或离心力，强使水和其他小的溶质分子通过半透膜，而蛋白质留在膜上，可选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质。 （2）蛋白质的盐析 中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析，将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子（如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失水”，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。 (3)电泳法 各种蛋白质在同一pH条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时，到达各自等电点的pH位置就停止，此法可用于分析和制备各种蛋白质。 (4) 离子交换层析法 当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时，带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上，随后用改变pH或离子强度办法将吸附的蛋白质洗脱下来 (5)超速离心法，既可以用来分离蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量不同的蛋白质其密度和形态各不相同再重力的作用，在溶液中逐渐沉降，直至其浮力与离心所产生的力相等，此时沉降停止。 4.何谓蛋白质的二级结构?蛋白质的二级结构主要有哪些形式? 蛋白质的二级结构(secondary structure)是指多肽链中主链原子的局部空间排列，不涉及侧链的构象。蛋白质二级以上结构统称为空间结构或高级结构。 （1）肽单元 肽键中的C、O、N和H四个原子和与之相邻的两个α碳原子位于同一刚性平面，构成一个肽单元(peptide unit) （2）多肽链主链围绕中心轴呈有规律的螺旋式上升，每3.6个氨基酸上升一圈，每个氨基酸残基向上平移0.15nm，故螺距为0.54nm。 （3）多肽链充分伸展，各肽键平面之间折叠成锯齿状，侧链R基团交错位于锯齿状结构的上下方。两条以上肽链或一条肽链内的若干肽段平行排列，它们之间靠链间肽键羰基中的氧和亚氨中的氢形成氢键，以稳定构象。氢键的方向与折叠的长轴垂直。 （4）β－转角在球状蛋白分子中，肽链主链常常会出现180°回折，回折部分就称为β－转角(β－blend或β-return)，β－转角由四个连续的氨基酸残基组成，第一个残基中羰基中的氧与第四个残基中亚氨基的氢形成氢键。β－转角由连续的三个肽单元构成。在二级结构中，除了α－螺旋、β－折叠和外，其余肽段的空间排列并无较强的规律性，将这些没有规律性的部分肽链构象称为无规卷曲。 5.试述蛋白质的结构层次及各级结构的概念。 (1)一级结构：即蛋白质的共价结构或平面结构，核心内容就是aa的排列顺序，它的改变涉及到蛋白质共价键的破坏和重建。一级结构的全部内容包括：肽链的个数、aa的顺序、二硫键的位置、非aa成分。 (2)二级结构：肽链主干在空间的走向。主干指的是肽平面与α-C构成的链子，空间走向以及维持这种走向的力量：氢键和R基团的影响（离子键、疏水键、空间障碍等）(3)三级结构：即蛋白质的三维结构、构象，指其中所有原子的空间排布，是结构域再经过卷曲和折叠后形成的。如果蛋白质是单条肽链，则三级结构就是它的最高级结构，三级结构由二硫键和次级键（氢键、疏水键、离子键、范德华力）维持。(4)级结构：多条肽链通过非共价键（氢键、疏水键、离子键、范德华力）形成的聚合体的结构就是四级结构，