第八章2010-4-miRNA辩析.ppt

非编码小分子RNA从“生物垃圾”到“年度分子” 真核生物基因组中99%为非编码序列，外显子和调控序列外称为“垃圾” 非编码序列转录出的RNA为“垃圾RNA分子” 非编码核糖核酸：除成熟mRNA分子外所有独立存在的RNA分子。 进化越高，“垃圾”越多？ 1993年，线虫，lin-4 2000年，线虫，let-7 很快分离出一类21-22 小分子RNA 1998, RNA干扰现象 2001，人工合成，siRNA，抑制同源序列基因的表达 至此，“垃圾”变“宝物” 非编码RNA的研究成果先后7次在近10年《scince》评选：年度十大科技突破 2000年，RNA的研究进展被美国《科学》杂志评为重大科技突破； 2001年“RNA干扰”作为当年最重要的科学研究成果之一，再次入选“十大科技突破”； 2002年12月20日，Science杂志将“Small RNA RNAi”评为2002年度最耀眼的明星。 同时， Nature杂志亦将Small RNA评为年度重大科技成功之一。 2003年，小核糖核酸的研究第四次入选“十大科技突破”，排在第四位。 RNA研究的突破性进展，是生物医学领域近20年来，可与HGP（人类基因组计划，生物通网站注）相提并论的最重大成果之一 MicroRNAmicroRNA是谁？  MicroRNA也可以写做miRNA ，是一种21－25nt长的单链小分子RNA。 它广泛存在于真核生物中，是一组不编码蛋白质的短序列RNA，其本身不具有开放阅读框（ORF）。成熟的miRNA，5′端有一个磷酸基团，3′端为羟基。 编码miRNAs的基因最初产生一个长的pri-RNA分子，这种初期分子还必须被剪切成约70-90个碱基大小、具发夹结构单链RNA前体（pre-miRNA）并经过Dicer酶加工后生成。 成熟的miRNA 5’端的磷酸基团和3′端羟基则是它与相同长度的功能RNA降解片段的区分标志。 miRNA 5‘端第一个碱基对U（尿苷）有强烈的倾向性，而对G却排斥，但第二到第四个碱基缺乏U。一般来讲，除第四个碱基外，其他位置碱基通常都缺乏C。这些分子能够与那些和它的序列互补的mRNA分子相结合，有时候甚至可以与特定的DNA片断结合。这种结合的结果就是导致基因的沉默。这种方式是身体调节基因表达的一个重要策略。 miRNA研究的开端 miRNA的研究起始于时序调控小RNA（stRNAs）。 1993年，Lee等在秀丽新小杆线虫（Caenorhabditis elegan）中发现了第一个定时调控胚胎后期发育的基因lin-4 2002年，Reinhart等又在线虫C.elegan中发现第二个异时性开关基因let-7 2001年10月《science》报道了三个实验室从线虫、果蝇和人体克隆的几十个类似C.elegan的lin-4的小RNA基因，称为microRNA。 随后多个研究小组在包括人类、果蝇、植物等多种生物物种中鉴别出数百个miRNAs，并且发现它与多种重要的生命过程有关。  MiRNA的作用方式 miRNA基因是一类高度保守的基因家族，按其作用模式不同可分为三种： 第一种以线虫lin-4为代表，作用时与靶标基因不完全互补结合，进而抑制翻译而不影响mRNA的稳定性（不改变mRNA丰度），这种miRNA是目前发现最多的种类； 第二种以拟南芥miR-171为代表，作用时与靶标基因完全互补结合，作用方式和功能与siRNA非常类似，最后切割靶mRNA； 第三种以let-7为代表，它具有以上两种作用模式：当与靶标基因完全互补结合时，直接靶向切割mRNA，如果蝇和Hela细胞中let-7直接介导RISC分裂切割靶mRNA；当与靶标基因不完全互补结合时，起调节基因表达的作用，如线虫中的let-7与靶mRNA3′端非翻译区不完全配对结合后，抑制调节基因的翻译。 MiRNA的特异性 研究表明MiRNAs在物种间具有高度的保守性、时序性和组织特异性——在特定的时间、组织才会表达。 细胞特异性或组织特异性是miRNA表达的主要特点，又如拟南芥中的miR-171仅在其花序中高水平表达，在某些组织低水平表达，在茎、叶等组织中却无任何表达的迹象；20-24h的果蝇胚胎提取物中可发现miR-12，却找不到miR3-miR6，在成年果蝇中表达的miR-1和let-7也无法在果蝇胚胎中表达，这同时体现了miRNA的又一特点——基因表达时序性。 MiRNA表达的时序性和组织特异性暗示miRNA的分布可能决定组织和细胞的功能特异性，也可能参与了复杂的基因调控，对组织的发育起重要作用。 MiRNA的产生 “话说在“广袤”的细胞质中游荡着一个名叫Dicer的浪子。与此同时，在细胞的腹地‘细胞核’中，一个身形颀长的RNA降生了即pri-miR