5-DNAreplication,mutation,injuryandrepair-3辩析.pptVIP

凯恩斯的实验结果可得到两个重要的结论 乳糖可诱使Lac +突变种持续产生，而不是因为饥饿所导致； 乳糖诱使细菌产生特定方向的突变，也就是乳糖只会诱使大肠杆菌的LacZ基因产生突变，而不影响其他的基因。 五、基因突变在药物评价中的应用 MMR 基因缺陷主要通过3 条途径促进肿瘤的发生与发展。 增加癌基因和肿瘤抑制基因的突变频率. 使一些重要的功能基因发生遗传不稳定性. 通过一些化学物质(如烷化剂等) 对细胞的损伤导致肿瘤发生。 SOS修复系统 差错倾向修复（Error prone repair） Jeam Weigle 等发现 UV 感染 细菌(用UV照射过) － 存活率高 λ噬菌体 细菌(UV未照射过) － 存活率低 UV-复活（UV-reactivation），也称W-复活 SOS反应（SOS response） 大肠杆菌中NER由UvrA、UvrB和UvrC共同完成。其修复过程为： 蛋白UvrA、UvrB识别损伤部位，识别过程中， UvrA、UvrB形成二聚体，一旦损伤部位被识别，UvrA帮助UvrB与损伤部位结合的更加紧密； 蛋白UvrA从DNA上脱落，UvrC开始与UvrB结合，共同作用于DNA； UvrB切断损伤侧的DNA，UvrC切断正常侧的DNA，UvrD切除损伤的DNA单链，并在双链上留下一个缺口； DNA聚合酶合成一段DNA来填补这个缺口； DNA连接酶进行连接缺口。 Deformation of DNA UvrAUvaB UvrA recognizes damage binds with UvrB UvrCUvrB UvrA released; UvrC binds withUvrB UvaC UvrB UvrBC nicks the damaged DNA Uva D UvrD remove the damaged ss DNA - PolI and ligase 哺乳动物细胞内，NER反应由核内的NER因子；XPA、RPA、XPC、TFⅡC、XPC和ERCC1-XPF共同完成核苷酸切除修复（图为人类） 三、复制后修复（postreplication repair） （一）大肠杆菌的重组修复系统（recombination repair） DNA复制时，DNA聚合酶到达一个损伤位置（如T双聚体），就停止DNA链的合成。等待一段很短的时间后，跳过损伤部位，DNA合成重新开始，复制完成后产生了两个子代DNA分子，一个是正常的DNA双链结构，另一个是新合成的带有缺口的DNA分子。 细胞内的重组修复系统可修复有缺口的DNA分子：主要是Rec（A，B，C，D）蛋白 将另一条正常母链上的一段与损伤子链缺口同源的DNA片段（供体）转移到子链缺口上（重组），形成完整子链，但在供体母链形成一个缺口。 供体母链的缺口以子链为模板，由DNA聚合酶 I 进行合成修复，形成正常的双链。 * （四）适应性突变 1988年凯恩斯等人于英国著名的《Nature》上，发表了一篇名为，《The origin of mutants》的文章， 发现了适应性突变。 凯恩斯所用的大肠杆菌的lacZ基因（其产物为半乳糖 ，可分解乳糖为葡萄糖和半乳糖）带有一个点突变，称为琥珀突变（amber mutation），这样的突变会使得lacZ基因产物转译（translate）不完全，故其产物会失去正常分解乳糖的功能─除非有突变发生，使得lacZ的产物能完全转译，否则带有这种基因的大肠杆菌便无法生长在以乳糖为唯一碳源的培养平板上。 三、突变体的分离与分析 （一）突变体的分离： 分子生物学研究中，基因突变可以在体外按照人们的设计进行，但是仍然有很多不需要的突变体，因此需要分离，方法有： 利用遗传分析方法，筛选、选择、富集需要的突变体，常见的例子是利用抗性基因，使带有抗性基因的突变体可以生长，其它被杀死。 （二）突变体的分析： 遗传检测法 ⑴ 根据重组载体的抗药性标志筛选： 如抗氨芐青霉素（anpr）、抗四环素(terr)、抗卡那霉素(kanr)等。当培养基中含有抗生素时，只有携带相应抗药性基因载体的细胞才能生存繁殖，这就把凡未能接受载体D