乳酸菌检验--2010国标.doc

GB 4789.35-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 乳酸菌检验 录入时间:2010-4-28 9:02:54 来源：国家卫生部 前 言 本标准代替GB/T 4789.35-2008《食品卫生微生物学检验 食品中乳酸菌检验》。 本标准与GB/T 4789.35-2008相比，主要变化如下： ——修改了乳酸菌总数、乳杆菌、双歧杆菌和嗜热链球菌的计数方法。 本标准的附录A为规范性附录。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： —— GB 4789.35-1996、GB/T 4789.35-2003、GB/T 4789.35-2008。 1 范围 本标准规定了含乳酸菌食品中乳酸菌（lactic acid bacteria）的检验方法。 本标准适用于含活性乳酸菌的食品中乳酸菌的检验。 2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日 期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 3 术语和定义 3.1 乳酸菌 lactic acid bacteria 一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称。本标准中乳酸菌主要为乳杆菌属（Lactobacillus）、 双歧杆菌属（Bifidobacterium）和链球菌属（Streptococcus）。 4 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 4.1 恒温培养箱：36℃±1℃。 4.2 冰箱：2℃～5℃。 4.3 均质器及无菌均质袋、均质杯或灭菌乳钵。 4.4 天平：感量 0.1 g。 4.5 无菌试管：18 mm×180 mm、15 mm×100 mm。 4.6 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 4.7 无菌锥形瓶：500 mL、250 mL。 5 培养基和试剂 5.1 MRS（Man Rogosa Sharpe）培养基及莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）改良 MRS 培养基：见附录 A 中 A.1。 5.2 MC 培养基（Modified Chalmers 培养基）：见附录 A 中 A.2。 5.3 0.5 %蔗糖发酵管：见附录 A 中 A.3。 5.4 0.5 %纤维二糖发酵管：见附录 A 中 A.3。 5.5 0.5 %麦芽糖发酵管：见附录 A 中 A.3。 5.6 0.5 %甘露醇发酵管：见附录 A 中 A.3。 5.7 0.5 %水杨苷发酵管：见附录A中A.3。 5.8 0.5 %山梨醇发酵管：见附录A中A.3。 5.9 0.5 %乳糖发酵管：见附录A中A.3。 5.10 七叶苷发酵管：见附录A中A.4。 5.11 革兰氏染色液：见附录A中A.5。5.12 莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）：化学纯。6 检验程序 乳酸菌检验程序见图1。 ? 7 操作步骤 7.1 样品制备 7.1.1 样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。 7.1.2 冷冻样品可先使其在 2℃～5℃条件下解冻，时间不超过 18 h，也可在温度不超过 45℃的条件，解冻时间不超过15min。 7.1.3 固体和半固体食品：以无菌操作称取 25 g 样品，置于装有 225 mL 生理盐水的无菌均质杯内， 于 8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，制成 1:10 样品匀液；或置于 225 mL 生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min 制成 1:10 的样品匀液。 7.1.4 液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品 25 mL 放入装有 225 mL 生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成 1:10 的样品匀液。 7.2 步骤 7.2.1 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 mL，沿管壁缓慢注于装有 9 mL 生理盐水的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。 7.2.2 另取 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做 10 倍递增样品匀液，每递增稀释一次，即换用1次 1mL 灭菌吸管或吸头。 7.2.3 乳酸菌计数 7.2.3.1 乳酸菌总数 根据待检样品活菌总数的估计，选择 2 个～3 个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取 0.1 mL 样品匀液分别置于 2 个 MRS 琼脂平板，使用 L 形棒进行表面涂布。36℃±1℃，厌氧培养 48 h±2 h 后计