细胞冷冻保存技术要素.pptVIP

细胞的低温保存 细胞低温冷冻贮存是细胞培养的常规工作。细胞冻存与细胞传代保存相比可以减少人力、经费，减少污染，减少细胞遗传性状的改变和延缓衰老。 目前，动物细胞一般保存于液氮中 （-196℃）。 一般在原代或传代2－10次内即大量冻存，作为原种（stock cells），取一支细胞进行传代繁殖，用毕再冻存，这样可保证长期使用和延缓衰老 。 如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶，从而减少细胞内冰晶对细胞的损伤；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。 在培养液中添加的保护剂： 二甲亚砜（Dimeethylsulfoide,DMSO）， 甘油,可使细胞免受低温冰晶形成、及渗透压改变而导致的物理损伤。 预先配制冻存保护液： 含20%血清培养基，10%DMSO，DMSO液用培养液配好，避免因临时配制产热而伤害细胞； 冻存和复苏的原则：慢冻快融 　　当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。 　　如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。 冻存培养细胞 (1)预保留细胞经消化分散后，用将其预冷却，4度 取对数生长期细胞，经胰酶消化后，